[發明專利]一種抑菌型芽孢桿菌及其固體發酵方法

在審

• 申請號: 202111114525.4
• 申請日: 2021-09-23
• 公開（公告）號: CN113832059A
• 公開（公告）日: 2021-12-24
• 發明（設計）人: 楊小進;劉旭樂;李保民;黃慶周;王春芳;李振田;李旺;曾慶勛;鮑佳梅;趙向陽;范收武
• 申請（專利權）人: 洛陽歐科拜克生物技術股份有限公司
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;A23K10/18;A61K35/742;A61P31/04;C12R1/07
• 代理公司: 成都市鼎宏恒業知識產權代理事務所(特殊普通合伙) 51248
• 代理人: 吳錦德

本發明涉及一種抑菌型芽孢桿菌及其固體發酵方法；本發明所述的抑菌型芽孢桿菌保藏地點為中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心；保藏時間為2021年4月6日；保藏登記入冊編號為CGMCC No.22124。本發明的優點有：通過固體發酵后仍然對對大腸桿菌和沙門氏菌等致病菌具顯著的抑菌性能，并且長期放置穩定性高，耐酸、耐膽鹽強、能夠工業規模化生產，更有利于微生態制劑產品的替抗。

技術領域

本發明屬于新保藏菌種種類技術領域；尤其涉及該菌種的液體發酵步驟、抑菌試驗方法。

背景技術

抗生素是20世紀最偉大的發現之一，近百年來，僅青霉素就拯救了大約2 億人的生命。抗生素在給人類帶來益處的同時也給養殖業創造了巨大的經濟效益。1951年，隨著美國食品與藥物管理局(FDA)首次批準在飼料中添加非處方型抗生素。由此，在全球范圍內，低劑量的抗生素作為生長促進劑(Antibiotics as Growth Promoter，AGP)被加入常規飼料中在畜牧行業內廣泛應用。它也見證了國際畜牧業的飛速發展。近70年來，先后有60余種抗生素應用于畜牧養殖業。然而由于抗生素在畜禽飼料中的廣泛使用尤其是超標使用，給細菌提供了足夠的機會以進化出應對各種藥物的耐藥性，進而導致各種病原菌的耐藥性得出現，直接威脅著畜牧和人類健康。隨著1986年，瑞典的在飼料中全面禁止添加抗生素，國外等國家開始陸續禁抗，隨著2019年農業農村部第194號公告的頒布，我國在2020年7月1號開始也實行全面禁抗，微生態制劑通過改變腸道菌群平衡，促進動物腸道健康，提高動物的免疫力和消化吸收率，同時也可以產生抑菌型的代謝產物，對各種致病菌具有很強的抑菌效果，并且不會產生耐藥性，是替代抗生素的首要手段之一。

發明內容

本發明正是為了解決上述問題缺陷，提供一種抑菌型芽孢桿菌及其固體發酵方法。本發明通過篩選得到一株芽孢桿菌，創造性的通過固體發酵的方式進行生產，在保留其抑菌效果同時也可以實現規模放大生產，使得其產能得到很大的提高，使其更加有利的用于飼料替抗產品的使用。

本發明采用如下技術方案實現。

一種抑菌型芽孢桿菌，本發明所述的抑菌型芽孢桿菌保藏地點為北京市朝陽區北辰西路1號院3號中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心；保藏時間為2021年4月6日；保藏登記入冊編號為CGMCC No.22124。分類命名：地衣芽孢桿菌Bacilluslicheniformis。

本發明所述的抑菌型芽孢桿菌參據生物材料為OKX101。

本發明上述的抑菌型芽孢桿菌的固體發酵方法，包括如下步驟：

步驟1)菌種活化；

步驟2)制備一級種子；

步驟3)制備二級種子罐；

步驟4)撒制備三級種子罐；

步驟5)固體發酵物料的滅菌；

步驟6)固體發酵。

本發明上述的液體發酵步驟，其步驟具體為，

步驟1)菌種活化：

將OKX101(保藏號為GCMCC22124)的甘油管通過劃線接入到LB固體的平板上，37℃倒置培養18-24h，然后挑取單菌落接入到LB液體搖瓶中，37℃、 200r/min搖床培養12-16h左右，然后將其稀釋涂布到LB平板，37℃倒置培養 12-18h，作為種子平板；

步驟2)制備一級種子

用接種環從種子平板上挑取單菌落接入到裝有LB培養基中的三角搖瓶中， 30-40℃靜置培養12-18h，作為一級種子搖瓶；

步驟3)制備二級種子罐