[發明專利]用于肺炎支原體檢測的核酸片段、引物探針組、試劑盒及其應用

有效

• 申請號: 202111112375.3
• 申請日: 2021-09-18
• 公開（公告）號: CN113930529B
• 公開（公告）日: 2022-07-01
• 發明（設計）人: 李春明;朱兆奎;孔君堯
• 申請（專利權）人: 上海伯杰醫療科技股份有限公司北京分公司;上海伯杰醫療科技股份有限公司
• 主分類號: C12Q1/689
• 分類號: C12Q1/689;C12Q1/686;C12N15/11;C12N15/31;C12R1/35
• 代理公司: 北京路浩知識產權代理有限公司 11002
• 代理人: 商秀玲

1.用于檢測肺炎支原體的特異性引物探針組，其特征在于，其包含一對特異性引物和一條探針，所述特異性引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.1-2所示，所述探針的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示；

所述探針含有熒光基團和淬滅基團，所述熒光基團標記于SEQ ID NO.3所示序列的5’末端，所述淬滅基團標記于SEQ ID NO.3所示序列的5’端第10個堿基；

所述特異性引物中含有鎖核酸修飾，其中，序列如SEQ ID NO.1所示的引物的鎖核酸修飾位于5’端第13個堿基，序列如SEQ ID NO.2所示的引物的鎖核酸修飾位于5’端第19個堿基。

2.權利要求1所述的特異性引物探針組的如下任一種應用：

(1)在制備用于檢測肺炎支原體RNA的試劑盒中的應用；

(2)在非診斷目的的肺炎支原體檢測中的應用。

3.試劑盒，其特征在于，包含權利要求1所述的特異性引物探針組。

4.根據權利要求3所述的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒還包含用于擴增內參基因的引物探針組，所述引物探針組中引物的序列如SEQ ID NO.4-5所示，探針的序列如SEQ IDNO.6所示。

5.根據權利要求4所述的試劑盒，其特征在于，所述內參基因的引物探針組中，探針含有熒光基團和淬滅基團，所述熒光基團標記于SEQ ID NO.6所示序列的5’端第9個堿基，所述淬滅基團標記于SEQ ID NO.6所示序列的5’端第15個堿基。

6.根據權利要求3所述的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒還包含PCR增強劑，所述PCR增強劑包含如下組分：氯化錳1.0-3.0g/L，SSB單鏈結合蛋白0.5-1.0g/L，疊氮鈉0.05-0.1g/L，BSA 0.5-1.2g/L。

7.根據權利要求6所述的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒還包含UDG酶。

8.根據權利要求3～7任一項所述的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒在用于肺炎支原體檢測時，熒光PCR的反應體系中，SEQ ID NO.1、2所示引物和SEQ ID NO.3所示探針的濃度比為2:2:1；

和/或，所述試劑盒在用于肺炎支原體檢測時，逆轉錄和熒光PCR的反應程序包括如下步驟：逆轉錄50℃、5min；預變性95℃、1min；變性95℃、1s，退火、延伸和檢測熒光55℃、15s，40個循環。