[發明專利]角膜接觸鏡淚蛋白含量測量方法及其應用

在審

• 申請號: 202111110787.3
• 申請日: 2021-09-18
• 公開（公告）號: CN115838391A
• 公開（公告）日: 2023-03-24
• 發明（設計）人: 丁夢瑤;孫碧霞
• 申請（專利權）人: 蘇州三個臭皮匠生物科技有限公司
• 主分類號: C07K1/14
• 分類號: C07K1/14;G01N21/31;G01N33/68
• 代理公司: 蘇州簡理知識產權代理有限公司 32371
• 代理人: 楊瑞玲

1.一種有效測量角膜接觸鏡淚蛋白含量的方法，其特征在于，

所述方法通過微量紫外分光光度計檢測角膜接觸鏡蛋白提取溶液中的蛋白濃度，具體包括：

提供蛋白提取溶液，所述蛋白提取溶液包括8M鹽酸胍水溶液；

將表面吸附有蛋白的角膜接觸鏡放置在所述蛋白提取溶液中，所述蛋白提取溶液將所述蛋白自所述角膜接觸鏡上分離，自所述蛋白提取溶液中取出所述角膜接觸鏡，通過所述微量紫外分光光度計檢測所述蛋白提取溶液中的蛋白濃度，得到鏡片吸附蛋白濃度值，通過所述鏡片吸附蛋白濃度值和蛋白提取液體積計算得到鏡片吸附蛋白含量值。

2.根據權利要求1所述的有效測量角膜接觸鏡淚蛋白含量的方法，其特征在于，所述方法還包括：

制備所述表面吸附有蛋白的角膜接觸鏡：將待培養的角膜接觸鏡和蛋白培養液置于培養皿中密封培養，鏡片培養過程中，所述蛋白培養液中的一部分蛋白游離在所述蛋白培養液中，一部分蛋白沉淀在所述角膜接觸鏡上，剩余部分蛋白沉淀在所述培養皿內壁上；

于內壁上沉淀有蛋白的所述培養皿中加入乙腈三氟乙酸溶液，振蕩、靜置預定時長，使得所述培養皿內壁上的蛋白脫落并溶于所述乙腈三氟乙酸溶液中，通過所述微量紫外分光光度計檢測所述乙腈三氟乙酸溶液中的蛋白濃度，將所述蛋白濃度與所述乙腈三氟乙酸溶液的體積相乘，得到沉淀在所述培養皿內壁上的蛋白含量。

3.根據權利要求1或2所述的有效測量角膜接觸鏡淚蛋白含量的方法，其特征在于，其還包括：

制備所述表面吸附有蛋白的角膜接觸鏡，具體包括：

配置蛋白培養液，記錄蛋白培養液的原始蛋白濃度，將所述角膜接觸鏡置于所述蛋白培養液中培養48～72小時，獲得表面吸附有蛋白的角膜接觸鏡；

其中，配置所述蛋白培養液包括根據所述蛋白培養液中的蛋白的等電點調節所述蛋白培養液的PH值；

所述角膜接觸鏡于所述蛋白培養液中的培養溫度范圍為36℃～42℃；

將所述角膜接觸鏡的內凹面朝上置于所述蛋白培養液中。

4.根據權利要求3所述的有效測量角膜接觸鏡淚蛋白含量的方法，其特征在于，

將待培養的角膜接觸鏡和所述蛋白培養液加入培養皿中，37℃恒溫密封培養48小時，獲得表面吸附有蛋白的角膜接觸鏡；

分別檢測游離在所述蛋白培養液中的蛋白含量、沉淀在所述角膜接觸鏡上的蛋白含量，以及沉淀在所述培養皿內壁上的蛋白含量，計算獲得所述方法對蛋白的提取率。

5.根據權利要求4所述的有效測量角膜接觸鏡淚蛋白含量的方法，其特征在于，

檢測游離在所述蛋白培養液中的蛋白含量，具體包括:

通過所述微量紫外分光光度計檢測游離在所述蛋白培養液中的蛋白濃度，再將所述蛋白濃度與所述蛋白培養液的體積相乘，獲得游離在所述蛋白培養液中的蛋白含量，記為培養后剩余培養液中蛋白含量；

檢測沉淀在所述角膜接觸鏡上的蛋白含量，具體包括：

將培養后的所述角膜接觸鏡置于8M鹽酸胍水溶液中振蕩、靜置預定時長，使得所述角膜接觸鏡上的蛋白自鏡片上脫離并溶解于所述8M鹽酸胍水溶液中，通過所述微量紫外分光光度計檢測所述8M鹽酸胍水溶液中的蛋白濃度，將所述蛋白濃度與所述8M鹽酸胍水溶液的體積相乘，得到沉淀在所述角膜接觸鏡上的蛋白含量，記為鏡片蛋白提取液中蛋白含量；

檢測沉淀在所述培養皿內壁上的蛋白含量，具體包括：

于內壁上沉淀有蛋白的培養皿內加入乙腈三氟乙酸溶液，振蕩、靜置預定時長，使得所述培養皿內壁上的蛋白脫落并溶解于所述乙腈三氟乙酸溶液中，通過所述微量紫外分光光度計檢測所述乙腈三氟乙酸溶液中的蛋白濃度，將所述蛋白濃度與所述乙腈三氟乙酸溶液的體積相乘，得到沉淀在所述培養皿內壁上的蛋白含量，記為培養皿沉淀蛋白提取液中蛋白含量；

計算獲得所述方法對蛋白的提取率，具體包括：

其中，于內壁上沉淀有蛋白的培養皿內加入的所述乙腈三氟乙酸溶液包括：500份純水、500份乙腈和2份三氟乙酸。