[發明專利]一種基于液相色譜-串聯質譜同位素內標法測定香辛料中食源性興奮劑的方法

有效

• 申請號: 202111101648.4
• 申請日: 2021-09-18
• 公開（公告）號: CN113820415B
• 公開（公告）日: 2023-10-24
• 發明（設計）人: 張海超;艾連峰;張婧雯;王敬;李瑋;魏欣欣;劉慧玲;劉寶如
• 申請（專利權）人: 石家莊海關技術中心
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06;G01N30/72;G01N30/86
• 代理公司: 北京睿智保誠專利代理事務所(普通合伙) 11732
• 代理人: 周新楣

1.一種基于液相色譜-串聯質譜同位素內標法測定香辛料中食源性興奮劑的方法，其特征在于，包括如下步驟：

(1)香辛料與內標液混合，得到混合液；

(2)在混合液中加入提取液，混勻，離心取上清得到香辛料提取液；

(3)香辛料提取液于Oasis MCX固相萃取柱上進行凈化處理，得到的洗脫液于39～41℃下氮吹干，復溶劑復溶，過膜，得到待測香辛料；

(4)利用液相色譜-串聯質譜系統測定待測香辛料中興奮劑的峰面積，根據標準曲線，計算得到香辛料中食源性興奮劑的含量。

2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，香辛料與內標液的質量體積比為1g:49～51μL；

內標液為D4-去甲烏藥堿和D9-曲托喹酚的混合液；

D4-去甲烏藥堿的質量濃度為10ng/mL；

D9-曲托喹酚的質量濃度為10ng/mL。

3.根據權利要求2所述的方法，其特征在于，提取液的加入量與香辛料的體積質量比為9.5～10.5mL:1g；

提取液為0.4～0.6％甲酸乙醇溶液；

0.4～0.6％甲酸乙醇溶液中0.4～0.6％甲酸與乙醇的體積比為1:198～200。

4.根據權利要求3所述的方法，其特征在于，混勻的方式為均質混勻；

均質的轉速為9000～11000r/min；

均質的時間為0.8～1.2min；

離心的轉速為9000～11000r/min；

離心的時間為4～6min。

5.根據權利要求4所述的方法，其特征在于，洗脫時的洗脫劑為4.5～5.5％氨水甲醇溶液；

4.5～5.5％氨水甲醇溶液中4.5～5.5％氨水與甲醇的體積比為1:18～20；

洗脫時洗脫劑的加入量與香辛料的體積質量比為1.8～2.2mL:1g。

6.根據權利要求5所述的方法，其特征在于，復溶劑為甲酸水溶液與甲醇的混合液；

甲酸水溶液的質量濃度為0.09～0.11％；

甲酸水溶液與甲醇的體積比為3.5～4.5:1；

復溶劑的加入量與香辛料的體積質量比為0.45～0.55mL:1g；

膜為有機濾膜；

有機濾膜的孔徑為0.22μm。

7.根據權利要求6所述的方法，其特征在于，液相色譜-串聯質譜系統中色譜條件為：色譜柱為2.1×100mm，1.7μm的Waters ACQUITY UPLC BEH C₁₈色譜柱；流動相A為質量濃度為0.1％的甲酸水溶液；流動相B為甲醇溶液；流速為0.4mL/min；柱溫為35℃；進樣量為5μL；

梯度洗脫程序為0～0.5min，10％的流動相B；

0.5～3.5min，10～90％的流動相B；

3.5～5min，90％的流動相B；

5～5.01min，90～10％的流動相B；

5.01～7min，10％的流動相B。

8.根據權利要求7所述的方法，其特征在于，液相色譜-串聯質譜系統中質譜條件為：電噴霧電離源ESI，反應監測模式為MRM；離子源溫度為350℃；毛細管溫度為250℃；加熱模塊溫度為350℃；氮氣流速：3.0L/min，干燥氣流速：10.0L/min，加熱氣流速：10.0L/min。

9.根據權利要求1～8任意一項所述的方法，其特征在于，興奮劑為甲烏藥堿和/或曲托喹酚。

10.根據權利要求9所述的方法，其特征在于，甲烏藥堿的標準曲線為Y＝3.19066X+0.181625，r＝0.99989；

曲托喹酚的標準曲線為Y＝0.906370X+0.0299261，r＝0.99994；

X表示：樣品中所含興奮劑的濃度與內標液中所含相應興奮劑濃度的比值；

Y表示：樣品中所含興奮劑的峰面積與內標液中所含相應興奮劑峰面積的比值。