[發(fā)明專利]一種海葡萄組織培養(yǎng)方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 202111100834.6
• 申請日: 2021-09-18
• 公開（公告）號: CN114158478B
• 公開（公告）日: 2022-08-23
• 發(fā)明（設計）人: 蔣雄;陸小康;詹啟成;黎東均;王宏申
• 申請（專利權）人: 廣州百德園藝有限公司
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 廣州凱東知識產權代理有限公司 44259
• 代理人: 曾志環(huán)

本發(fā)明公開了一種海葡萄組織培養(yǎng)方法，包括：外植體殺菌消毒及接種；啟動誘導培養(yǎng)；增殖擴繁培養(yǎng)，先增殖擴繁培養(yǎng)基1培養(yǎng)，再轉到BA濃度比增殖擴繁培養(yǎng)基1低的增殖擴繁培養(yǎng)基2培養(yǎng)；然后壯苗成苗培養(yǎng)，達到出貨標準的生根苗出貨，株高未達標的繼續(xù)壯苗培養(yǎng)，已達出貨標準但未出貨的苗或株高達標但未生根的苗轉移到生根培養(yǎng)基進行生根培養(yǎng)，優(yōu)點包括：接種培養(yǎng)基、啟動誘導培養(yǎng)基采用合適的激素種類及用量，使外植體為頂芽、帶節(jié)莖段時都能被誘導長芽；增殖擴繁培養(yǎng)基不同階段采用不同的激素用量，使增殖苗增殖率提高；在增殖苗經過壯苗成苗培養(yǎng)后，其株高、生根狀態(tài)不同的情況下靈活采用不同培養(yǎng)基進行培養(yǎng)，可以提高組培成功率、出貨效率。

技術領域

本發(fā)明涉及植物組織培養(yǎng)技術領域，尤其涉及一種海葡萄組織培養(yǎng)方法。

背景技術

海葡萄(Coccoloba uvifera)，蓼科海葡萄屬，常綠灌木、小喬木。單葉互生，雌雄異株，葉全緣，葉接近圓形，葉寬一般會比葉長稍大。新葉通常為紅褐色，成熟后轉變成綠色，衰老葉片表面出現(xiàn)紫紅色，葉脈清晰。大棚養(yǎng)護的母本基本為綠葉。

海葡萄常被作為沿海城市的行道樹，或作為海岸防風林樹種，它們亦可作庭院觀賞植物。海葡萄果實可用來制造果醬或直接食用。果實成熟后花被呈紫紅色，而肉質呈漿果狀，直徑約2厘米，像葡萄般一簇一簇的。

海葡萄采用莖枝培養(yǎng)芽長芽途徑比較難以短時間內實現(xiàn)大量繁殖。其組培獲得叢生芽的效果不佳，新芽長出率低，伸長生長緩慢，外植體切口處多數(shù)出現(xiàn)愈傷組織膨大，稀松；而且對外植體材料要求單一，多數(shù)需要采用節(jié)莖段，采用頂芽作為外植體誘導長芽成功率極低。需要研發(fā)采用新的組培工藝，提高繁殖率、生根率，以滿足生產需求。

發(fā)明內容

本發(fā)明的目的在于提供一種海葡萄組織培養(yǎng)方法，以解決現(xiàn)有技術中海葡萄組織培養(yǎng)方法的繁殖率、生根率不高的問題。

為了達到上述目的本發(fā)明采用如下技術方案：

一種海葡萄組織培養(yǎng)方法，包括如下步驟：

(1)獲得外植體并殺菌消毒；

(2)外植體接種；

(3)萌芽后進入啟動誘導培養(yǎng)，得到組培苗，啟動誘導培養(yǎng)基成分包含MS、BA、NAA、蔗糖、卡拉膠，pH為6.2；

(4)啟動誘導得到的組培苗增殖率穩(wěn)定，團塊苗芽數(shù)穩(wěn)定，進入增殖擴繁期，首先采用增殖擴繁培養(yǎng)基1培養(yǎng)，增殖擴繁培養(yǎng)基1包含MS、BA、NAA、蔗糖、卡拉膠，pH為6.2；隨著代數(shù)的增加后出現(xiàn)葉片小而畸形、泡沫狀愈傷組織偏多，增殖苗節(jié)間短且芽少的情況，或出現(xiàn)苗玻璃化、泡沫愈傷組織增多/畸形情形，需轉到BA濃度比增殖擴繁培養(yǎng)基1低的增殖擴繁培養(yǎng)基2培養(yǎng)，增殖擴繁培養(yǎng)基2包含MS、BA、NAA、蔗糖、卡拉膠，pH為6.2；

(5)把增殖擴繁后得到的增殖苗進行壯苗成苗培養(yǎng)，壯苗成苗培養(yǎng)后達到出貨標準的生根苗可直接裝袋出貨，株高未達標的可繼續(xù)壯苗成苗培養(yǎng)，達出貨標準但未出貨的苗或株高達標但未生根的苗轉移到生根誘導培養(yǎng)基進行生根培養(yǎng)；

(6)生根誘導培養(yǎng)，生根誘導培養(yǎng)基包含1/2MS、NAA、蔗糖、卡拉膠，pH為6.2。

進一步地，所述步驟(1)獲得外植體的過程包括：預處理，清理掉累積在母本莖葉的灰塵，將母本莖葉控干，讓太陽光紫外線進行消毒，選取表皮依舊綠色的當年生枝條，切取較干凈、性狀良好、健壯枝條，剪去多余葉片；細處理，環(huán)割枝條上的托葉鞘，注意不要損傷莖干，將枝條切成單個節(jié)，每個節(jié)上下各留1cm節(jié)間部分，最后得到外植體：頂芽及帶節(jié)莖段；整個過程注意保持干凈，細處理后的外植體標準，要求莖段潔凈，莖干不割傷，除非蟲蛀、腐爛不得已必須割去，割去托葉鞘的節(jié)上不沾有灰塵；