[發明專利]一種海葡萄組織培養方法

有效

• 申請號: 202111100834.6
• 申請日: 2021-09-18
• 公開（公告）號: CN114158478B
• 公開（公告）日: 2022-08-23
• 發明（設計）人: 蔣雄;陸小康;詹啟成;黎東均;王宏申
• 申請（專利權）人: 廣州百德園藝有限公司
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 廣州凱東知識產權代理有限公司 44259
• 代理人: 曾志環

1.一種海葡萄Coccoloba uvifera組織培養方法，其特征在于：

包括如下步驟：

（1）獲得外植體頂芽及帶節莖段并殺菌消毒；

（2）外植體接種；

接種培養基成分包含MS、濃度為0.5mg/L BA、濃度為0.01mg/L NAA、濃度為30g/L蔗糖和濃度為5.5g/L卡拉膠，pH為6.2；

（3）萌芽后進入啟動誘導培養，得到組培苗；

啟動誘導培養基成分包含：MS、濃度為0.5mg/L BA、濃度為0.01mg/L NAA、濃度為30g/L蔗糖和濃度為5.5g/L卡拉膠，pH為6.2；

（4）啟動誘導得到的組培苗增殖率穩定，團塊苗芽數穩定，進入增殖擴繁期，首先采用增殖擴繁培養基1培養；隨著代數的增加后出現葉片小而畸形、泡沫狀愈傷組織偏多，增殖苗節間短且芽少的情況，或出現苗玻璃化、泡沫愈傷組織增多/畸形情形，需轉到BA濃度比增殖擴繁培養基1低的增殖擴繁培養基2培養；

增殖擴繁培養基1成分包含：MS、濃度為0.3mg/L BA、濃度為0.01mg/L NAA、濃度為30g/L蔗糖和濃度為5.5g/L卡拉膠，pH為6.2；

增殖擴繁培養基2成分包含：MS、濃度為0.1mg/L BA、濃度為0.01mg/L NAA、濃度為30g/L蔗糖和濃度為5.5g/L卡拉膠，pH為6.2；

（5）把增殖擴繁后得到的增殖苗進行壯苗成苗培養，壯苗成苗培養后達到出貨標準的生根苗直接裝袋出貨，株高未達標的繼續壯苗成苗培養，達出貨標準但未出貨的苗或株高達標但未生根的苗轉移到生根誘導培養基進行生根培養；

壯苗成苗培養基成分包含：1/4MS、濃度為0.2 g/L AC、濃度為30g/L蔗糖和濃度為5.5g/L卡拉膠，pH為6.2；

（6）生根誘導培養，生根誘導培養基成分包含：1/2 MS、濃度為0.7~1.5 mg/L NAA 、濃度為30g/L蔗糖和濃度為5.5g/L卡拉膠，pH為6.2。

2.根據權利要求1所述的一種海葡萄Coccoloba uvifera組織培養方法，其特征在于：

所述步驟（1）獲得外植體的過程包括：預處理，清理掉累積在母本莖葉的灰塵，將母本莖葉控干，讓太陽光紫外線進行消毒，選取表皮依舊綠色的當年生枝條，切取較干凈、性狀良好、健壯枝條，剪去多余葉片；細處理，環割枝條上的托葉鞘，注意不要損傷莖干，將枝條切成單個節，每個節上下各留1cm節間部分；整個過程注意保持干凈，細處理后的外植體標準，要求莖段潔凈，莖干不割傷，除非蟲蛀、腐爛不得已必須割去，割去托葉鞘的節上不沾有灰塵；

外植體殺菌消毒過程包括：先用75%酒精擦拭外植體表面，再倒入備用好的升汞到外植體材料瓶中，升汞液位必須淹沒外植體，旋緊瓶蓋；在升汞消毒過程中，每隔 2-3 分鐘用力搖動外植體瓶，使外植體和瓶內壁充分被升汞消毒徹底，每次快速搖動 7-8 次后，將外植體瓶輪流正放和倒放；如果升汞溶液出現變色或渾濁時，當升汞消毒時間到目標時間一半時，倒出廢升汞到一個裝廢升汞的瓶子中，然后新加入新升汞到淹沒外植體液位為止，蓋緊外植體瓶蓋繼續消毒，方法如上；如果升汞溶液不出現變色或渾濁，就不需中途更換升汞；

無菌水清潔：當升汞消毒結束后，取一個無菌水瓶打開蓋子傾倒出無菌水到外植體材料瓶中，左手握住外植體材料瓶下部輕輕搖動清洗外植體和瓶內壁，搖動7-8次，倒出清洗后的無菌水到一個空廣口瓶中存放，然后再打開第二瓶無菌水蓋子繼續清潔，如此清潔5-6次后便消毒完畢；

消毒時間：0.1%升汞消毒8-12min。

3.根據權利要求1所述的一種海葡萄Coccoloba uvifera組織培養方法，其特征在于：

所述步驟（2）接種過程包括：切去外植體因升汞消毒造成的傷口，頂芽和帶節莖段均切成1cm長，然后夾住外植體形態上部將外植體形態下部插入到接種培養基中，插入培養基深度至少3mm，使外植體不倒伏，每瓶接種一個外植體；把培養基置于26-30℃條件下，散光培養45～60天后，外植體萌芽。