[發明專利]一種透明質酸寡糖組合物及其制備方法和用途

在審

• 申請號: 202111094368.5
• 申請日: 2021-09-17
• 公開（公告）號: CN113801904A
• 公開（公告）日: 2021-12-17
• 發明（設計）人: 羅德學;張天萌;吳梓萌;王景;張旭;胡愷強;張曉鷗;李紅紅;郭學平
• 申請（專利權）人: 山東華熙海御生物醫藥有限公司;華熙生物科技股份有限公司
• 主分類號: C12P19/00
• 分類號: C12P19/00;C12P19/04;C12P19/12;C12P19/14;A61K8/60;A61K8/73;A61Q19/00
• 代理公司: 北京唐頌永信知識產權代理有限公司 11755
• 代理人: 劉偉

本發明提供一種透明質酸寡糖組合物及其制備方法和用途，其中所述透明質酸寡糖組合物包括還原端為糖醛酸結構的透明質酸寡糖。該透明質酸寡糖組合物可以提高神經酰胺的合成和或透明質酸合成酶1(HAS1)和/或透明質酸合成酶3(HAS3)的表達。本發明通過將酶解反應耦聯超濾、納濾可以使酶解得到的寡糖及時從酶解體系中分離出來，減少寡糖對酶解的抑制作用，提高酶解效率，縮短酶解時間。酶解完后，利用超濾把酶截留下來可以再重復利用1?2次，提高酶的重復利用度，同時省掉了加熱滅酶活階段，減少了加熱對寡糖活性的影響，使寡糖的活性得到最大化的保留。減少活性炭加入量，減少了對操作人員的炭污染，簡化了純化工藝。

技術領域

本發明屬于生物工程技術領域，具體地，涉及一種透明質酸寡糖組合物及其制備方法和用途。

背景技術

透明質酸(hyaluronic acid，HA)是一種酸性黏多糖，是由N-乙酰葡糖胺和D-葡糖醛酸雙糖重復單位通過β-(1→4)糖苷鍵和β-(1→3)糖苷鍵構成的無分支高分子糖胺聚糖，存在于動物組織細胞間質和某些細菌的莢膜中。透明質酸廣泛用于醫藥、化妝品、食品等領域，分子量一般為10⁵～10⁷道爾頓(Da)。

不同分子量的透明質酸表現出不同的生物活性，低分子量透明質酸甚至表現出與高分子量透明質酸完全相反的活性。很多文獻都對透明質酸在創傷修復中發揮的作用進行了報道，尤其是低分子量及透明質酸寡糖作為活性物質受到更多關注。因利用酸法、堿法等制備透明質酸寡糖如果應用于大規模生產的話，有較高的風險，可能對操作人員或設備造成傷害，利用酶切法制備寡糖有著更大的優勢。

對于還原端為糖醛酸的透明質酸四糖，尤其是包含HA2-12的透明質酸寡糖混合物(糖醛酸還原端)制備及功效研究報道較少。專利CN 111040048A公開了一種超低分子量透明質酸及其制備方法，該專利沒有及時將酶解過程產生的寡糖分離出來，而這存在的寡糖會對酶解正向反應造成一定的抑制，造成酶解時間的延長，增加了后期純化的難度。該專利同時也沒披露其在促進透明質酸合成酶以及神經酰胺合成方面的作用。

另外，物質的結構對其生物活性會產生影響，寡糖類物質亦是如此。

非專利文獻1批露了硫酸化透明質酸(sHA)具有良好的生物學功能，特定的硫酸化模式在調節糖胺聚糖和蛋白質之間的結合模式中起著關鍵作用，證明了帶有6-O-硫酸化(sHA-6S)的sHA四糖，在體外促進大鼠E18海馬神經元軸突生長方面具有重要作用。

非專利文獻2采用熒光偏振競爭測定來分析合成化合物的相對結合親和力，并揭示了合成硫酸軟骨素樣四糖和中期因子之間具有相互作用。可以看出透明質酸寡糖(HAOs)聚合度或者殘基的不同，會產生不同的生物活性功能。這是值得去深入研究的。現有技術中，尚未有具有糖醛酸端基的超小分子量透明質酸對神經酰胺和透明質酸酶合成方面影響的研究。

非專利文獻3通過改變鹽酸濃度，選擇性地產生具有不同聚合度和還原端的透明質酸寡糖(HAOs)，使用MOE軟件對HAOs與CD44和TLR4進行分子對接模擬的數據表明，HAOs與CD44和TLR4的結合能力隨著HAOs的聚合度增加而增加，同時當HAOs的還原端為GlcNAc殘基時結合能力顯著增加，而當還原端為GlcA殘基時結合能力沒有顯著變化。

非專利文獻1：Unravel a neuroactive sHA sulfation pattern withneurogenesis activity by a library of defined oligosaccharides.Yao,W.,Chen,M.,Dou,X.,Jin,H.,Zhang,X.,Zhu,Y.,... Li,Z.(2019).Unravel a neuroactive sHAsulfation pattern with neurogenesis activity by a library of definedoligosaccharides.European journal of medicinal chemistry,163,583-596.