[發明專利]一種固定化尿酸酶活性的方法

在審

• 申請號: 202111093864.9
• 申請日: 2021-09-17
• 公開（公告）號: CN113804638A
• 公開（公告）日: 2021-12-17
• 發明（設計）人: 顧凌巍;張令慧;張丁一
• 申請（專利權）人: 江蘇恰瑞生物科技有限公司
• 主分類號: G01N21/33
• 分類號: G01N21/33
• 代理公司: 無錫知更鳥知識產權代理事務所(普通合伙) 32468
• 代理人: 郭元聰

本發明提出了一種測定固定化尿酸酶活性的方法，其操作方法如下：步驟1、A試管中加入尿酸溶液并水浴中保溫；步驟2、向A試管中加入尿酸酶液攪拌均勻；步驟3、向A試管中加入KOH并測定吸光度；步驟4、B試管中加入水溶液并水浴中保溫；步驟5、向B試管中加入尿酸酶液并攪拌均勻；步驟6、向B試管中加入KOH并測定吸光度；步驟7、C試管中加入尿酸溶液并水浴中保溫后，加入固定化尿酸酶攪拌均勻；步驟8、將固定化尿酸酶過濾后，測定吸光度；步驟9、D試管中加入水溶液并水浴中保溫后，加入固定化尿酸酶攪拌均勻；步驟10、將固定化尿酸酶過濾后，測定吸光度，借此，本發明具有能夠測定固定化尿酸酶對尿酸分解效果的優點。

技術領域

本發明屬于尿酸監測技術領域，特別涉及一種測定固定化尿酸酶活性的方法。

背景技術

尿酸氧化酶的活性測定原理主要是通過尿酸在290-293nm有最大吸收峰而其終產物尿囊素在該區域未有吸收峰的差異來建立的。故在早期的關于尿酸酶文獻或是專利中，尿酸酶活性測定的分析方法主要是采用分光光度法，即通過在尿酸氧化酶存在下尿酸溶液在290-293nm的吸收值降低來計算酶活性。

但是，采用上述辦法后，有以下兩個缺點：1、由于尿酸不會完全溶于血漿，其溶解度不穩定，測定結果并不精確，因此很難在常溫下不易測定尿酸酶分解血液中尿酸的含量。2、修飾在樹脂上的尿酸酶基本不會脫落在在水和血液中，難以測定固定化后的尿酸酶活力大小和半衰期。

發明內容

本發明提出一種測定固定化尿酸酶活性的方法，能夠解決上述問題。

本發明的技術方案是這樣實現的：一種測定固定化尿酸酶活性的方法，其操作方法如下：

步驟1、A試管中加入尿酸溶液，并于40℃的水浴中保溫5min；

步驟2、向A試管中加入適當稀釋的尿酸酶液，攪拌均勻，使其反應完全；

步驟3、向A試管中加入20％的KOH用于停止尿酸酶的反應，并通過紫外分光光度計于290nm處測定吸光度；

步驟4、B試管中加入水溶液，并于40℃的水浴中保溫5min；

步驟5、向B試管中加入適當稀釋的尿酸酶液，攪拌均勻，使其反應完全；

步驟6、向B試管中加入20％的KOH用于停止尿酸酶的反應，并通過紫外分光光度計于290nm處測定吸光度；

步驟7、C試管中加入尿酸溶液，并于40℃的水浴中保溫5min后，加入固定化尿酸酶并攪拌均勻，使其反應完全；

步驟8、將固定化尿酸酶通過濾膜過濾后，通過紫外分光光度計于290nm處測定吸光度；

步驟9、D試管中加入水溶液，并于40℃的水浴中保溫5min后，加入固定化尿酸酶并攪拌均勻；

步驟10、將固定化尿酸酶通過濾膜過濾后，通過紫外分光光度計于290nm處測定吸光度；

步驟11、將所得的吸光度代入至標準曲線中計算尿酸含量。

作為一種優選的實施方式，步驟2和步驟5中尿酸酶液的濃度為1mg/ml。

作為一種優選的實施方式，步驟1中加入的尿酸溶液的體積為10ml，濃度為100mg/L；步驟7中加入的尿酸溶液的體積為10ml。

作為一種優選的實施方式，步驟4中加入的水溶液的體積為10ml，酸堿度為PH8.5，步驟9中加入的水溶液的體積為10ml，酸堿度為PH8.5。

作為一種優選的實施方式，步驟7中加入的固定化尿酸酶體積為1g，步驟9中加入的固定化尿酸酶體積為1g。

作為一種優選的實施方式，步驟11中的標準曲線為y＝12.976x-0.1957。