[發明專利]一種固定化尿酸酶活性的方法

在審

• 申請號: 202111093864.9
• 申請日: 2021-09-17
• 公開（公告）號: CN113804638A
• 公開（公告）日: 2021-12-17
• 發明（設計）人: 顧凌巍;張令慧;張丁一
• 申請（專利權）人: 江蘇恰瑞生物科技有限公司
• 主分類號: G01N21/33
• 分類號: G01N21/33
• 代理公司: 無錫知更鳥知識產權代理事務所(普通合伙) 32468
• 代理人: 郭元聰

1.一種測定固定化尿酸酶活性的方法，其特征在于，其操作方法如下：

步驟1、A試管中加入尿酸溶液，并于40℃的水浴中保溫5min；

步驟2、向A試管中加入適當稀釋的尿酸酶液，攪拌均勻，使其反應完全；

步驟3、向A試管中加入20％的KOH用于停止尿酸酶的反應，并通過紫外分光光度計于290nm處測定吸光度；

步驟4、B試管中加入水溶液，并于40℃的水浴中保溫5min；

步驟5、向B試管中加入適當稀釋的尿酸酶液，攪拌均勻，使其反應完全；

步驟6、向B試管中加入20％的KOH用于停止尿酸酶的反應，并通過紫外分光光度計于290nm處測定吸光度；

步驟7、C試管中加入尿酸溶液，并于40℃的水浴中保溫5min后，加入固定化尿酸酶并攪拌均勻，使其反應完全；

步驟8、將固定化尿酸酶通過濾膜過濾后，通過紫外分光光度計于290nm處測定吸光度；

步驟9、D試管中加入水溶液，并于40℃的水浴中保溫5min后，加入固定化尿酸酶并攪拌均勻；

步驟10、將固定化尿酸酶通過濾膜過濾后，通過紫外分光光度計于290nm處測定吸光度；

步驟11、將所得的吸光度代入至標準曲線中計算尿酸含量。

2.根據權利要求1所述的一種測定固定化尿酸酶活性的方法，其特征在于，所述步驟2和步驟5中尿酸酶液的濃度為1mg/ml

3.根據權利要求1所述的一種測定固定化尿酸酶活性的方法，其特征在于，所述步驟1中加入的尿酸溶液的體積為10ml，濃度為100mg/L；步驟7中加入的尿酸溶液的體積為10ml。

4.根據權利要求1所述的一種測定固定化尿酸酶活性的方法，其特征在于，所述步驟4中加入的水溶液的體積為10ml，酸堿度為PH8.5，步驟9中加入的水溶液的體積為10ml，酸堿度為PH8.5。

5.根據權利要求1所述的一種測定固定化尿酸酶活性的方法，其特征在于，所述步驟7中加入的固定化尿酸酶體積為1g，步驟9中加入的固定化尿酸酶體積為1g。

6.根據權利要求1所述的一種測定固定化尿酸酶活性的方法，其特征在于，所述步驟11中的標準曲線為y＝12.976x-0.1957。

7.根據權利要求1所述的一種測定固定化尿酸酶活性的方法，其特征在于，所述步驟11中標準曲線的制作方法包括如下步驟：

步驟110、抽取母液25ml放于燒杯中，另外加入等體積的基底液進行稀釋，得到混合物A；

步驟111、抽取混合物A25ml放于燒杯中，另外加入等體積的基底液進行稀釋，得到混合物B，并同理繼續進行稀釋，直至稀釋9次，得到混合物C；

步驟112、將紫外分光光度計打開預熱20分鐘，并機器進行自檢；

步驟113、機器開蓋后按調零鍵，合上蓋子將波長調至293nm，加空白溶液，調滿度，透射比為100，測其9次稀釋溶液的吸光度，每次測3個重復；

步驟114、根據9次稀釋溶液的吸光度，制作標注曲線。

8.根據權利要求7所述的一種測定固定化尿酸酶活性的方法，其特征在于，所述母液為100mg/L的尿酸溶液，基底液為PH＝8.5的堿液，其中堿液為300mg NaOH和5L純水的混合物。

9.根據權利要求8所述的一種測定固定化尿酸酶活性的方法，其特征在于，所述母液的配置方法為：將100mg的尿酸加入PH＝8.5的基底液中，并放于37.5℃中，溶解3h，直至溶液變為清澈，并且無白色顆粒，放置一天后，用于標準溶液的配制。