[發明專利]一種同時檢測維生素K1、MK4和MK7的方法

有效

• 申請號: 202111093617.9
• 申請日: 2021-09-17
• 公開（公告）號: CN113933410B
• 公開（公告）日: 2022-10-14
• 發明（設計）人: 趙蓓蓓;佘旭輝;林清娜;董衡;李卓陽
• 申請（專利權）人: 廣州金域醫學檢驗中心有限公司
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06;G01N30/34;G01N30/72;G01N30/86
• 代理公司: 廣州廣典知識產權代理事務所(普通合伙) 44365
• 代理人: 曾銀鳳;庹玖玲

1.一種同時檢測維生素K1、MK4和MK7的方法，其特征在于，包括以下步驟：

取生物樣品，加入三種待測物的同位素內標混合溶液，再加入提取溶劑提取，離心，取上清液干燥后用復溶液溶解，得到待測樣品，采用液相色譜串聯質譜法檢測；

所述液相色譜串聯質譜法所采用的色譜柱為C18色譜柱，所述C18色譜柱為粒徑1.7μm，內徑2.1mm，長度50mm的BEH C18色譜柱；

流動相：A相為含0.2wt%甲酸的水溶液，B相為含0.2wt %甲酸的甲醇溶液；進樣量10 μL；柱溫為45℃；流速為0.5mL/min；

采用梯度洗脫，所述梯度洗脫的程序包括：

0~0.5min，流動相B的體積百分比為90%；

0.5~1min，流動相B的體積百分比由90%升高到97%；

1~2min，流動相B的體積百分比由97%升高到100%；

2~4.5min，流動相B的體積百分比為100%；

4.5~5.6min，流動相B的體積百分比由100%降低到90%；

5.6~6min，流動相B的體積百分比為90%。

2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述提取溶劑為正己烷；所述生物樣品為血漿、血清、腦脊液或尿液。

3.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述三種待測物的同位素內標混合溶液為：含有1.0~1.6ng/mL VK1-d7、0.8~1.4ng/mL MK4-d7和1.0~2.5 ng/mLMK7-d7的乙醇溶液；所述復溶液為甲醇或含甲酸的甲醇溶液。

4.根據權利要求3所述的方法，其特征在于，所述生物樣品和同位素內標混合溶液的體積比為1：1~3；和/或，所述生物樣品和復溶液的體積比為1 ： 0.20~1.0。

5.根據權利要求1~3任一項所述的方法，其特征在于，所述液相色譜串聯質譜法的質譜參數包括：

VK1定量離子對：451.4/187.2；

VK1定性離子對：451.4/199.2；

VK1-d7內標離子對：458.5/194.1；

MK4定量離子對：445.2/187.1；

MK4定性離子對：445.2/227.1；

MK4-d7內標離子對：452.3/194.1；

MK7定量離子對：649.5/187.1；

MK7定性離子對：649.5/227.2；

MK7-d7內標離子對：656.6/194.1；

采用APCI離子源，正離子模式，多重反應監測離子掃描模式。