[發(fā)明專利]一種富硒鐵皮石斛原球莖懸浮培養(yǎng)方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 202111093048.8
• 申請日: 2021-09-17
• 公開（公告）號: CN113711919A
• 公開（公告）日: 2021-11-30
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 韓素菊;梅闖
• 申請（專利權(quán)）人: 綿陽師范學(xué)院
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 西安研創(chuàng)天下知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 61239
• 代理人: 陳明星

本發(fā)明公開了一種富硒鐵皮石斛原球莖懸浮培養(yǎng)方法，其特征在于，包括以下步驟：步驟1：鐵皮石斛原球莖的誘導(dǎo)；步驟2：經(jīng)誘導(dǎo)后，選擇生長良好，大小均一且結(jié)構(gòu)疏松的鐵皮石斛原球莖進(jìn)行富硒懸浮培養(yǎng)。在鐵皮石斛原球莖富硒懸浮培養(yǎng)基為MS+2.0mg·L^?16?BA+0.5mg·L^?1NAA+30g·L^?1蔗糖+0.05mg·L^?1Na₂SeO₃，接種量為100g·L^?1，pH值為5.8，繼代周期為30d,此時(shí)原球莖的硒含量最高可達(dá)4.01mg·kg^?1，多糖含量為34.79％、生物堿含量為0.026％、總蛋白含量為28.25％。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于石斛栽培技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種富硒鐵皮石斛原球莖懸浮培養(yǎng)方法。

背景技術(shù)

鐵皮石斛(Dendrobium officinale)為蘭科多年生附生草本植物。1992年鐵皮石斛在《中國植物紅皮書》中被收載為瀕危植物。2020年版《中華人民共和國藥典》記載鐵皮石斛具有主治熱病津傷、口干煩渴、陰虛火旺、目暗不明等癥。臨床應(yīng)用上鐵皮石斛具有增強(qiáng)機(jī)體免疫力、抗氧化、抗疲勞、降低血壓、降血糖、抗腫瘤等方面的獨(dú)特功效。現(xiàn)有研究表明，人體與動(dòng)物體內(nèi)硒元素的缺乏與多種疾病的產(chǎn)生有一定的關(guān)系，而含硒的各類產(chǎn)品對于這些疾病可以起到緩解或治愈作用。硒具有抗癌、抗氧化的功效，還具有改善免疫系統(tǒng)，增強(qiáng)免疫細(xì)胞的生物學(xué)功能。無機(jī)硒相較于有機(jī)硒的安全性和吸收率要低，而當(dāng)前主要是依靠植物轉(zhuǎn)化技術(shù)的途徑來獲取有機(jī)硒，而通過生物轉(zhuǎn)化有利于提高有機(jī)硒的含量，最終進(jìn)入食物鏈，可供人或動(dòng)物食用。另外對植物進(jìn)行適量的施硒同時(shí)會(huì)促進(jìn)其生長發(fā)育并提高產(chǎn)品質(zhì)量。

發(fā)明內(nèi)容

本申請的目的在于提供一種富硒鐵皮石斛原球莖懸浮培養(yǎng)方法，可以直接從培養(yǎng)物中生產(chǎn)次級代謝產(chǎn)物，這些次生代謝產(chǎn)物具有很多生物活性，是植物藥的重要成分。

本發(fā)明采用的技術(shù)方案是：

一種富硒鐵皮石斛原球莖懸浮培養(yǎng)方法，包括以下步驟：

步驟1：疏松鐵皮石斛原球莖的誘導(dǎo)；

步驟2：經(jīng)誘導(dǎo)后，選擇生長良好、大小均一且結(jié)構(gòu)疏松的鐵皮石斛原球莖進(jìn)行富硒懸浮培養(yǎng)。

優(yōu)選的，在步驟1中，鐵皮石斛原球莖繼代于固體MS培養(yǎng)基中，在培養(yǎng)溫度為25±2℃、光照周期為12h/d、光照強(qiáng)度為2000lx的條件下進(jìn)行培養(yǎng)，連續(xù)繼代3次。

優(yōu)選的，所述固體MS培養(yǎng)基為MS培養(yǎng)基+1～2.5mg·L^-1 6-BA+0.25～1.0mg·L^-1NAA，pH值為5.8。

優(yōu)選的，所述固體MS培養(yǎng)基為MS培養(yǎng)基+2.0mg·L^-1 6-BA+0.5mg·L^-1NAA，pH值為5.8。

優(yōu)選的，在步驟2中，富硒懸浮培養(yǎng)鐵皮石斛原球莖包括以下步驟：

在步驟1連續(xù)繼代3次后，選擇生長良好，大小均一且結(jié)構(gòu)疏松的鐵皮石斛原球莖接種到MS+2.0mg·L^-1 6-BA+0.5mg·L^-1NAA+0～0.25mg·L^-1Na₂SeO₃+30g·L^-1蔗糖，pH值為5.8的液體培養(yǎng)基中，接種量為1～5g每瓶，于恒溫振蕩器中進(jìn)行培養(yǎng)生長，共培養(yǎng)51d；在培養(yǎng)第6d開始，每隔3d隨機(jī)收獲5瓶，重復(fù)3次；將收獲的樣品進(jìn)行處理之后，按照測定方法，測定其鮮重(fresh weight，F(xiàn)W)、干重(dry weight，DW)以及增殖系數(shù)，并繪制原球莖的生長曲線。