[發(fā)明專利]一種動(dòng)物源性食品中恩諾沙星碳量子點(diǎn)熒光免疫快速檢測試劑盒及其檢測方法

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• 申請日: 2021-09-16
• 公開（公告）號(hào): CN113721024A
• 公開（公告）日: 2021-11-30
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 溫雷;李詩潔;張佳楠;李響
• 申請（專利權(quán)）人: 天津溫陽生物技術(shù)有限公司
• 主分類號(hào): G01N33/58
• 分類號(hào): G01N33/58;G01N33/533
• 代理公司: 天津合正知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 12229
• 代理人: 張艷梅

本發(fā)明公開了一種動(dòng)物源性食品中恩諾沙星碳量子點(diǎn)熒光免疫快速檢測試劑盒及其檢測方法，屬于熒光免疫分析領(lǐng)域。試劑盒由反應(yīng)杯和試劑組成；其中所述反應(yīng)杯包被有包被抗原，所述試劑由辣根過氧化物酶標(biāo)記抗體工作液；恩諾沙星系列標(biāo)準(zhǔn)溶液；20倍濃縮磷酸鹽洗滌液；10倍濃縮磷酸鹽復(fù)溶液；碳量子點(diǎn)熒光反應(yīng)液A及碳量子點(diǎn)熒光反應(yīng)液B組成。以碳量子點(diǎn)作為熒光底物，建立了恩諾沙星熒光淬滅免疫分析方法。該試劑盒檢測時(shí)間為30min，檢測限為0.3ng/mL，批內(nèi)變異系數(shù)小于8％，批間變異系數(shù)小于15％，水產(chǎn)樣品的回收率為90％±30％。本發(fā)明的熒光免疫快速檢測試劑盒具有特異性高、靈敏度好、操作簡便及可實(shí)現(xiàn)定量檢測的優(yōu)點(diǎn)。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及物源性食品中恩諾沙星碳量子點(diǎn)熒光免疫快速檢測試劑盒及其檢測方法，屬于免疫檢測技術(shù)領(lǐng)域。

背景技術(shù)

恩諾沙星(Enrofloxacin，ENR)是一種專門用于治療動(dòng)物組織感染的廣譜殺菌藥，隨著近年來的廣泛使用，用藥帶來的副作用日益顯現(xiàn)，動(dòng)物性食品中恩諾沙星的殘留被人體攝入后越來越危害人體健康，因此對(duì)恩諾沙星進(jìn)行有效的快速檢測十分必要。

基于抗原抗體特異性結(jié)合反應(yīng)的免疫分析技術(shù)因其獨(dú)特的識(shí)別形式以及其特異性、可逆性及反應(yīng)階段性等優(yōu)異的特點(diǎn)得到了廣泛的關(guān)注及研究，并逐漸成為臨床疾病診斷的重要檢測手段。免疫診斷技術(shù)也與生化診斷和分子診斷技術(shù)構(gòu)成了體外診斷的三大領(lǐng)域。在世界糧農(nóng)組織(FAO)的推薦下，免疫分析方法也被逐漸應(yīng)用于食品安全檢測分析領(lǐng)域，并已成為了食品安全檢測的重要組成部分。包括ELISA，化學(xué)發(fā)光酶免疫分析，熒光免疫分析，免疫層析傳感分析(ICS)在內(nèi)的各種免疫測定已被廣泛用于現(xiàn)場快速檢測農(nóng)產(chǎn)品和動(dòng)物產(chǎn)品中的食品污染物殘留。

以熒光信號(hào)代替比色信號(hào)的免疫分析具有靈敏度高、抗擊質(zhì)干擾能力強(qiáng)等特性，被廣泛應(yīng)用。目前熒光分析的主要標(biāo)記材料多為熒光微球(FM)，量子點(diǎn)(QD)和上轉(zhuǎn)換納米粒子(UCNP)等，但QDs重金屬毒性大以及UCNPs熒光種類少等問題成為了二者關(guān)鍵性的限制因素。碳量子點(diǎn)(CDs)作為一類具有優(yōu)異光致發(fā)光性能的零維(OD)納米材料，是繼半導(dǎo)體量子點(diǎn)成功合成以來被廣泛研究的熒光納米材料。基于此，通過簡單的方法在水溶液環(huán)境中制備了碳量子點(diǎn)，并建立了快速，高靈敏度的物源性食品中恩諾沙星碳量子點(diǎn)熒光免疫快速檢測試劑盒。目前，碳量子點(diǎn)熒光免疫快速檢測試劑盒還未見報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容

有鑒于此，本發(fā)明提供了用于動(dòng)物源性食品中恩諾沙星檢測的碳量子點(diǎn)熒光免疫快速檢測試劑盒及其檢測方法，為了實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明的技術(shù)方案是這樣實(shí)現(xiàn)的：

一種動(dòng)物源性食品中恩諾沙星碳量子點(diǎn)熒光免疫快速檢測試劑盒，包括盒體，設(shè)在盒體內(nèi)的反應(yīng)杯和設(shè)在盒體內(nèi)的試劑；其中所述反應(yīng)杯包被有包被抗原，所述試劑包括：辣根過氧化物酶標(biāo)記抗體工作液；恩諾沙星系列標(biāo)準(zhǔn)溶液；20倍濃縮磷酸鹽洗滌液；10倍濃縮磷酸鹽復(fù)溶液；碳量子點(diǎn)熒光反應(yīng)液A及碳量子點(diǎn)熒光反應(yīng)液B。

優(yōu)選的，碳量子點(diǎn)熒光反應(yīng)液A包含過氧化氫和碳量子點(diǎn)，碳量子點(diǎn)熒光反應(yīng)液B包含3,3',5,5'-四甲基聯(lián)苯胺和碳量子點(diǎn)。

碳量子點(diǎn)的制備包括如下步驟：

(1)碳量子點(diǎn)的合成：將3g檸檬酸和5g尿素添加到10mL超純水中以形成透明溶液，然后將溶液在800W微波爐中加熱5分鐘，在此期間溶液從無色液體變?yōu)樽厣詈笞優(yōu)榘岛稚拇貭罟腆w，冷卻至室溫后，加入20mL水以溶解產(chǎn)物；

(2)碳量子點(diǎn)的純化：將溶解后的產(chǎn)物于5000rpm離心10min后，裝入3500Da透析袋，常溫下用水透析過夜，得到棕色具有熒光的溶液，在365nm激發(fā)光激發(fā)下，在400nm-600nm處有熒光。

所述反應(yīng)杯為容積為300μL或500μL或其他容積的單孔或8聯(lián)反應(yīng)杯；所述恩諾沙星系列標(biāo)準(zhǔn)溶液分別是從恩諾沙星純品中稀釋得到，恩諾沙星標(biāo)準(zhǔn)品中恩諾沙星濃度分別為：0.3ng/mL、0.9ng/mL、2.7ng/mL、8.1ng/mL和24.3ng/mL。