[發明專利]一種分析外泌體電荷異質性的方法

有效

• 申請號: 202111083397.1
• 申請日: 2021-09-16
• 公開（公告）號: CN113533589B
• 公開（公告）日: 2021-12-17
• 發明（設計）人: 葛嘯虎;韓春樂;趙剛剛;陸路;董鳳偉
• 申請（專利權）人: 天九再生醫學（天津）科技有限公司
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/34
• 代理公司: 天津諾德知識產權代理事務所(特殊普通合伙) 12213
• 代理人: 欒志超;王旭

本發明公開一種分析外泌體電荷異質性的方法，采用離子交換色譜對外泌體溶液進行檢測，流動相A和流動相B進行梯度洗脫，利用離子交換色譜將外泌體根據表面帶電差異劃分為亞群，有效地將外泌體進行分離，使用餾分收集器對這些不同的亞群進行回收，進而進行外泌體的定性與表面帶電情況的研究。本發明方案能夠充分確認圖譜中各組分的相對含量，這樣的檢測方法重復性好，也能夠對外泌體進行精準的分離純化。

技術領域

本發明屬于外泌體檢測與分析領域，尤其是涉及一種分析外泌體電荷異質性的方法。

背景技術

外泌體是由多泡體(MVB)與質膜融合而分泌的，是被磷脂雙層膜包裹的顆粒。這些類型的細胞外囊泡(EVs)直徑為30 ~ 150 nm，富含與細胞內信號傳導相關的物質。外泌體可以從多種體液中分離出來，如血液、尿液、唾液、母乳、羊水、腹水和腦脊液。實驗證明外泌體在調節細胞生長中起著至關重要的作用，特別是在腫瘤細胞的生長和轉移中。外泌體能夠通過細胞間信號傳導介導對病原體和腫瘤的適應性免疫應答。外泌體傳遞的蛋白質、RNA和DNA分子等物質可以將信號轉導到其他細胞，然后在生理和病理狀態下調節這些細胞的功能。它們也可能是重要的生物標志物，用于人類疾病的診斷，或預測和監測治療結果，特別是癌癥。外泌體的研究已成為近年來的熱門話題，特別是在轉化醫學領域。

外泌體一般呈現微觀不均一性，即“異質性”，包括電荷、分子量、形態等相關的異構體。這些異構體可能來自本身，例如外泌體表面的糖基化修飾蛋白、磷脂等分子，也可能來自純化、制劑等制造過程及貯存過程的任何階段。其中由于外泌體分子所帶電荷差異造成的異質性稱為電荷異構體，電荷異質性對外泌體的穩定性及其生物學功能發揮的影響還有待進一步的驗證。

發明內容

為解決上述技術問題，本發明提供一種分析外泌體電荷異質性的方法。

本發明采用的技術方案是：一種分析外泌體電荷異質性的方法，采用離子交換色譜對外泌體溶液進行檢測和/或分離，流動相A和流動相B進行梯度洗脫，洗脫過程中包括多于兩個的固定值洗脫階段。

優選地，離子交換色譜柱為陰離子色譜柱，優選地，弱陰離子交換色譜柱為BIADEAE-0.1 Analytical Column (1.3 μm)色譜柱。

優選地，流動相A為緩沖液，流動相B為緩沖液-鹽溶液；

流動相A和流動相B的pH值為7.0-8.0，優選為7.2-8.0；

緩沖液濃度為5-50mM，優選為20mM；

鹽濃度為0.2-2M，優選為0.25-0.85M。

優選地，緩沖液為Tris緩沖液，鹽溶液為鈉鹽溶液。

優選地，流動相A 和流動相B中還包含保護劑。

優選地，保護劑為蔗糖、乳糖和海藻糖中的一種或多種。

優選地，保護劑濃度為0.5-5%，優選為2%。

優選地，洗脫過程中包括6個固定值洗脫階段，固定值依次為62％流動相A、54％流動相A、46％流動相A、38％流動相A、28％流動相A和18％流動相A，相鄰固定值洗脫階段調整時長為0.1-3min。