[發(fā)明專利]一種分析外泌體電荷異質(zhì)性的方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 202111083397.1
• 申請日: 2021-09-16
• 公開（公告）號: CN113533589B
• 公開（公告）日: 2021-12-17
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 葛嘯虎;韓春樂;趙剛剛;陸路;董鳳偉
• 申請（專利權(quán)）人: 天九再生醫(yī)學（天津）科技有限公司
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/34
• 代理公司: 天津諾德知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(特殊普通合伙) 12213
• 代理人: 欒志超;王旭

1.一種分析外泌體電荷異質(zhì)性的方法，其特征在于：采用離子交換色譜對外泌體溶液進行檢測和/或分離，流動相A和流動相B進行梯度洗脫，所述流動相A 和所述流動相B中還包含保護劑，所述保護劑濃度為0.5-5%，洗脫過程中包括多于兩個的固定值洗脫階段；

所述流動相A為緩沖液，所述流動相B為緩沖液-鹽溶液，所述保護劑為蔗糖、乳糖和海藻糖中的一種或多種。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的分析外泌體電荷異質(zhì)性的方法，其特征在于：離子交換色譜柱為陰離子色譜柱。

3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的分析外泌體電荷異質(zhì)性的方法，其特征在于：所述流動相A和所述流動相B的pH值為7.0-8.0；所述緩沖液濃度為5-50mM；所述鹽濃度為0.2-2M。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的分析外泌體電荷異質(zhì)性的方法，其特征在于：所述緩沖液為Tris緩沖液，所述鹽溶液為鈉鹽溶液。

5.根據(jù)權(quán)利要求1、2和4中任一所述的分析外泌體電荷異質(zhì)性的方法，其特征在于：所述保護劑濃度為2%。

6.根據(jù)權(quán)利要求1、2和4中任一所述的分析外泌體電荷異質(zhì)性的方法，其特征在于：洗脫過程中包括6個固定值洗脫階段，固定值依次為62％流動相A、54％流動相A、46％流動相A、38％流動相A、28％流動相A和18％流動相A，相鄰固定值洗脫階段調(diào)整時長為0.1-3min。

7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的分析外泌體電荷異質(zhì)性的方法，其特征在于：梯度洗脫條件包括0.0-2.0min，100％流動相A；2.0-5.0min，100-75％流動相A；5.0-5.2min，75-62%流動相A；5.2-7.7min，62％流動相A；7.7-7.9min，62-54％流動相A；7.9-10.4min，54％流動相A；10.4-10.6min，54-46％流動相A；10.6-13.1min，46％流動相A；13.1-13.3min，46-38％流動相A；13.3-15.8min，38％流動相A；15.8-16.0min，38-28％流動相A；16.0-18.5min，28％流動相A；18.5-18.7min，28-18％流動相A；18.7-21.2min，18％流動相A；21.2-21.4min，18-0％流動相A；21.4-23.9min，0％流動相A。

8.根據(jù)權(quán)利要求6所述的分析外泌體電荷異質(zhì)性的方法，其特征在于：流動相流速為0.3 -1.0ml/min；柱溫為20℃-60℃；檢測波長為280nm。

9.根據(jù)權(quán)利要求1、2、4、7和8中任一所述的分析外泌體電荷異質(zhì)性的方法，其特征在于：根據(jù)洗脫時間分別收集不同類型電荷異質(zhì)性的外泌體。

10.根據(jù)權(quán)利要求1、2、4、7和8中任一所述的分析外泌體電荷異質(zhì)性的方法，其特征在于：所述外泌體為奶源外泌體。