[發明專利]BmSPI38突變體及其應用

有效

• 申請號: 202111081313.0
• 申請日: 2021-09-15
• 公開（公告）號: CN113621056B
• 公開（公告）日: 2022-06-24
• 發明（設計）人: 李游山;張杰
• 申請（專利權）人: 陜西理工大學
• 主分類號: C07K14/81
• 分類號: C07K14/81;C12N15/15;C12N15/70;C12N1/21;C12R1/19
• 代理公司: 西安銘澤知識產權代理事務所(普通合伙) 61223
• 代理人: 崔瑞迎

1.BmSPI38突變體在制備蛋白酶抑制劑中的應用，其特征在于，野生型BmSPI38的氨基酸序列由SEQ ID NO.1中第23位至第80位組成，所述BmSPI38突變體為：

1）對枯草桿菌蛋白酶和彈性蛋白酶抑制活性增強的BmSPI38突變體，所述突變體是將SEQ ID NO.1所示第54 位的甘氨酸突變為精氨酸、賴氨酸、絲氨酸、蘇氨酸、丙氨酸或谷氨酰胺；

2）同時具有枯草桿菌蛋白酶、彈性蛋白酶和胰蛋白酶抑制活性的BmSPI38突變體，所述突變體是將SEQ ID NO.1所示第54 位的甘氨酸突變為精氨酸或賴氨酸。

2.如權利要求1所述的應用，其特征在于，是利用定點突變引物對如SEQ ID NO.2所示野生型BmSPI38的基因序列進行定點突變，得到所述BmSPI38突變體。

3.如權利要求2所述的應用，其特征在于，所述BmSPI38突變體的構建方法包括如下步驟：

S1、設計定點突變引物，使上下游引物都帶有突變位點；

S2、以BmSPI38-p28載體作為模板，使用DNA聚合酶，用特異性突變引物進行 PCR 反應擴增，反應產物用瓊脂糖凝膠電泳檢測；S3、利用 Dpn I 進行酶切反應處理 PCR 產物；

S4、將酶切反應處理的PCR 產物轉化入Trans1-T1感受態細胞，挑選陽性克隆進行測序驗證，然后提取突變質粒；

S5、將突變質粒轉入宿主表達菌株中，誘導表達得到BmSPI38突變體。