[發(fā)明專利]一種代謝工程改造大腸桿菌發(fā)酵制備β-丙氨酸的方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202111076165.3
• 申請(qǐng)日: 2021-09-14
• 公開（公告）號(hào): CN113817659B
• 公開（公告）日: 2023-07-25
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 周哲敏;徐建;周麗;崔文璟;劉中美;程中一;韓來闖;郭軍玲
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 江南大學(xué)
• 主分類號(hào): C12N1/21
• 分類號(hào): C12N1/21;C12N15/70;C12N15/64;C12N15/60;C12N15/53;C12N15/54;C12N15/31;C12P13/06;C12R1/19
• 代理公司: 哈爾濱市陽光惠遠(yuǎn)知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 23211
• 代理人: 林娟

1.一種高效合成β-丙氨酸的重組大腸桿菌，其特征在于，所述重組大腸桿菌過表達(dá)了天冬氨酸-α-脫羧酶、天冬氨酸氨裂解酶、磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶、甘油脫氫酶和二羥丙酮激酶，并敲除了乳糖操縱子阻遏蛋白、乙醛羧酸循環(huán)抑制子、延胡索酸酶；

天冬氨酸-α-脫羧酶序列的NCBI?Reference?Sequence:?NP_001096055.1；天冬氨酸氨裂解酶序列的NCBI?Reference?Sequence:?NP_418562.4；

磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶序列的NCBI?Reference?Sequence:?NP_418391.1；甘油脫氫酶序列的NCBI?Reference?Sequence:?NP_418380.4；

二羥丙酮激酶序列的NCBI?Reference?Sequence:?NP_415718.6、NP_415717.1、NP_415716.4；

延胡索酸酶為延胡索酸酶A和延胡索酸酶C，延胡索酸酶A序列的NCBI?ReferenceSequence:?NP_416129.1，延胡索酸酶C序列的NCBI?Reference?Sequence:NP_416128.1；

以大腸桿菌B0016-082BB為宿主。

2.如權(quán)利要求1所述的重組大腸桿菌，其特征在于，乳糖操縱子阻遏蛋白序列的NCBIReference?Sequence:?NP_414879.3；乙醛羧酸循環(huán)抑制子iclR序列的NCBI?ReferenceSequence:?NP_418442.2。

3.含有權(quán)利要求1或2所述重組大腸桿菌的微生物制劑。

4.一種生產(chǎn)β-丙氨酸的方法，其特征在于，以甘油為底物，利用權(quán)利要求1或2所述重組大腸桿菌或權(quán)利要求3所述的微生物制劑發(fā)酵生產(chǎn)。

5.如權(quán)利要求4所述的方法，其特征在于，將權(quán)利要求1或2所述重組大腸桿菌或權(quán)利要求3所述的微生物制劑加入反應(yīng)體系，控制溶氧不低于45%，控制轉(zhuǎn)速為200~900?rpm，通氣量為2~10?L/min，溫度為35~38℃，pH為6.5~7.5。

6.如權(quán)利要求5所述的方法，其特征在于，流加堿液使反應(yīng)體系的pH為6.5~7.5，從第一次溶氧反彈開始流加發(fā)酵補(bǔ)料培養(yǎng)基。

7.權(quán)利要求1或2所述重組大腸桿菌或權(quán)利要求3所述的微生物制劑或權(quán)利要求4~6任一所述生產(chǎn)β-丙氨酸的方法在制備β丙酮酸中的應(yīng)用。