[發明專利]一種用于檢測T-2毒素的turn-on型試紙條及其制備方法

在審

• 申請號: 202111061005.1
• 申請日: 2021-09-10
• 公開（公告）號: CN113588959A
• 公開（公告）日: 2021-11-02
• 發明（設計）人: 張西亞;丁明月;黨夢;毛燁炫;黃現青;謝新華;宋蓮軍;王田林;張彤彤;李子哲;王尤一
• 申請（專利權）人: 河南農業大學
• 主分類號: G01N33/577
• 分類號: G01N33/577;G01N33/558;G01N33/543;G01N33/533;G01N33/53
• 代理公司: 鄭州聯科專利事務所(普通合伙) 41104
• 代理人: 時立新

本發明公開了一種用于檢測T?2毒素的turn?on型試紙條及其制備方法，屬于食品快速檢測技術領域。該試紙條由底板、樣品墊、吸收墊和硝酸纖維素膜（NC膜）組成。通過選用時間分辨熒光微球作為熒光材料，將其與BSA牛血清白蛋白進行偶聯，將制備的復合物固定在試紙條上，用作熒光供體；以膠體碳標記抗體復合物為猝滅劑，在NC膜上噴涂時間分辨熒光微球標記BSA牛血清白蛋白復合物和T?2抗原的混合物作為檢測線，噴涂羊抗鼠IgG抗體作為質控線，組裝成turn?on型側流層析檢測試紙條。可以用于T?2毒素的現場檢測，增加檢測的靈敏度和檢測速度，適合大規模應用和批量化生產，具有很好的應用開發前景。

技術領域

本發明涉及一種turn-on型試紙條，尤其涉及一種用于檢測T-2毒素的turn-on型試紙條及其制備方法，屬于食品快速檢測技術領域。

背景技術

T-2毒素是倍半萜烯類化合物，廣泛分布于自然界，主要由三線鐮刀菌(Fusariumtrieinetum)和梨孢鐮刀菌(Fusarium poae)產生，是聯合國糧農組織統計的全世界每年污染約25％農產品的真菌毒素之一。T-2毒素是單端孢霉烯族毒素之一，是單端孢毒性最強的毒素，不僅可以引起惡心、頭暈、嘔吐、腹部擴張及疼痛、畏寒及腹瀉等急性中毒，也能抑制DNA、RNA和蛋白質的合成，具有較強的基因毒性、免疫毒性和血液毒性。由毒素污染造成的農產品營養和經濟直接損失及中毒引發的應急搶救等間接損失巨大，世界各國制定了T-2毒素限量標準和法規，而且不斷降低限量標準值。在現有的T-2毒素含量測定方法中，高效液相色譜法和酶聯免疫分析法靈敏度較差、檢測時間長，逐漸不能滿足需求。因此發展對T-2毒素高靈敏的檢測方法成為當務之急。

Turn-on型檢測模式試紙條作為一種提高靈敏度的新型檢測模式發展迅猛。與turn-off型競爭模式相比，turn-on型檢測模式的檢測信號隨著目標化合物濃度的增加而增強，它的靈敏度定義為信號開始出現的目標物濃度。一般來說，識別暗狀態下的光信號增強要比檢測光猝滅過程容易得多。因此，大多數turn-on模式的試紙條在實際應用中表現出的靈敏度在μg/kg數量級，而大多數turn-off型模式的試紙條的靈敏度在mg/kg到μg/kg數量級。Turn-on模式的試紙條目前被用于檢測凝血酶、玉米赤霉烯酮、四環素等。無論基于哪種機理制備turn-on模式的試紙條，熒光供體材料和熒光猝滅劑的選擇對提高檢測靈敏度有非常重要作用。目前常用的熒光供體材料包括量子點、上轉換納米粒子，時間分辨熒光材料，熒光猝滅材料包括膠體金，銀納米粒子。量子點和上轉換納米粒子等熒光供體材料的合成條件苛刻，貴重金屬猝滅劑成本較高，因此阻礙了turn-on模式的側流層析檢測的進一步應用。膠體碳是由蠟燭等物質燃燒制備，有合成簡單、無毒、穩定性高、不需要活化、偶聯簡單等特點。在膠體碳作為標記物的側流層析應用中，憑借其黑色而與白色的NC膜對比形成很高的信噪比，大大提高靈敏度。在膠體碳作為熒光猝滅材料的檢測應用中，膠體碳展現寬的吸收波譜，對上轉換納米粒子的熒光展現高達89％淬滅效率。時間分辨熒光微球由稀土元素組成，具有來源廣，化學穩定性高、發光壽命長、耐光漂白程度高、發射峰窄，斯托克斯位移大，熒光延遲發射而降低背景噪音的特性，被用來提高檢測的靈敏度。因此，以膠體碳為熒光猝滅劑，以時間分辨熒光微球為熒光供體材料，制備出一種高靈敏度、成本低檢測速度快的試紙條，具有潛在的應用前景，目前未見相關報道。

發明內容

鑒于此，本發明旨在提出一種用于檢測T-2毒素的turn-on型試紙條及其制備方法，該試紙條以時間分辨熒光微球標記BSA牛血清白蛋白復合物作為熒光供體，將膠體碳與抗體偶聯復合物作為猝滅劑，實現高靈敏度、成本低快速檢測。

為達到本發明目的，所述試紙條通過如下方法制備而成：

(1)清洗時間分辨熒光微球：用pH 6.0MES緩沖液稀釋時間分辨熒光微球，混勻后，離心，棄上清，沉淀，按相同的步驟再次洗滌，將其重懸于pH 6.0MES緩沖液中。