[發(fā)明專利]一種用于檢測(cè)T-2毒素的turn-on型試紙條及其制備方法

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202111061005.1
• 申請(qǐng)日: 2021-09-10
• 公開（公告）號(hào): CN113588959A
• 公開（公告）日: 2021-11-02
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 張西亞;丁明月;黨夢(mèng);毛燁炫;黃現(xiàn)青;謝新華;宋蓮軍;王田林;張彤彤;李子哲;王尤一
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 河南農(nóng)業(yè)大學(xué)
• 主分類號(hào): G01N33/577
• 分類號(hào): G01N33/577;G01N33/558;G01N33/543;G01N33/533;G01N33/53
• 代理公司: 鄭州聯(lián)科專利事務(wù)所(普通合伙) 41104
• 代理人: 時(shí)立新

1.一種用于檢測(cè)T-2毒素的turn-on型試紙條，由PVC底板、樣品墊、吸收墊和硝酸纖維素膜組成，其特征在于，以時(shí)間分辨熒光微球標(biāo)記BSA牛血清白蛋白復(fù)合物作為熒光供體，以膠體碳標(biāo)記抗體復(fù)合物作為猝滅劑；

所述時(shí)間分辨熒光微球標(biāo)記BSA牛血清白蛋白復(fù)合物為BSA加入到活化的時(shí)間分辨熒光微球中，室溫孵育，得到；

所述膠體碳標(biāo)記抗體復(fù)合物為T-2毒素的單克隆抗體與膠體碳溶液混勻，室溫反應(yīng)；加入BSA牛血清白蛋白溶液，室溫封閉，經(jīng)離心，棄上清，復(fù)溶，得到。

2.制備如權(quán)利要求1所述的用于檢測(cè)T-2毒素的turn-on型試紙條的方法，其特征在于，方法如下：

（1）清洗時(shí)間分辨熒光微球：用pH 6.0 MES緩沖液稀釋時(shí)間分辨熒光微球，混勻后，離心，棄上清，沉淀，按相同的步驟再次洗滌，將其重懸于pH 6.0 MES緩沖液中；

（2）活化時(shí)間分辨熒光微球：在步驟（1）所得的溶液中依次加入1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亞胺鹽酸鹽和N-羥基琥珀酰亞胺，室溫孵育，然后將活化的時(shí)間分辨熒光微球離心，棄上清，將沉淀重懸于pH 6.0 MES緩沖液中；

（3）制備時(shí)間分辨熒光微球標(biāo)記BSA牛血清白蛋白：將BSA牛血清白蛋白加入到活化后的時(shí)間分辨熒光微球中，室溫孵育，得到時(shí)間分辨熒光微球標(biāo)記BSA牛血清白蛋白復(fù)合物；

（4）清洗：將步驟（3）制備的時(shí)間分辨熒光微球標(biāo)記BSA牛血清白蛋白復(fù)合物溶液經(jīng)過離心，棄上清，加入到pH 7.4 PBS緩沖液重懸，再重復(fù)一次離心，棄上清，最終重懸于pH 7.4PBS緩沖液；

（5）制備膠體碳標(biāo)記抗體復(fù)合物：將T-2毒素的單克隆抗體與膠體碳溶液混勻，室溫反應(yīng)；加入BSA牛血清蛋白溶液，室溫封閉，將封閉后的混合液離心，棄上清，復(fù)溶，得到膠體碳標(biāo)記抗體復(fù)合物；

（6）組裝turn-on型側(cè)流層析檢測(cè)試紙條：將硝酸纖維素膜粘貼到底板中間，在NC膜上噴涂時(shí)間分辨熒光微球標(biāo)記BSA牛血清白蛋白復(fù)合物和T-2抗原的混合物作為檢測(cè)線，噴涂羊抗鼠IgG抗體作為質(zhì)控線，置于烘箱中干燥，然后分別將吸收墊和樣品墊粘貼在底板兩端，最后將組裝好的試紙條切條，密封干燥保存。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的用于檢測(cè)T-2毒素的turn-on型試紙條的制備方法，其特征在于，步驟（3）中時(shí)間分辨熒光微球和BSA牛血清白蛋白的體積質(zhì)量比為0.1mL:4mg。

4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的用于檢測(cè)T-2毒素的turn-on型試紙條的制備方法，其特征在于，步驟（5）中0.11 mg/mL的T-2單克隆抗體與1×膠體碳溶液的體積比為50 μL：1 mL。

5.根據(jù)權(quán)利要求2所述的用于檢測(cè)T-2毒素的turn-on型試紙條的制備方法，其特征在于，以時(shí)間分辨熒光微球的添加量計(jì)算，步驟（6）中所述時(shí)間分辨熒光微球標(biāo)記BSA牛血清白蛋白復(fù)合物和T-2抗原的混合物中時(shí)間分辨熒光微球標(biāo)記BSA復(fù)合物的濃度為TRFM-BSA0.03 μg/mL；T-2抗原的濃度為0.9 mg/mL，混合物的噴量為0.8 μL/cm；所述羊抗鼠IgG抗體濃度為0.67 mg/mL，噴量為0.8 μL/cm。