[發明專利]一種檢測乳制品中多種晚期糖基化終末產物的方法

在審

• 申請號: 202111058154.2
• 申請日: 2021-09-09
• 公開（公告）號: CN113702546A
• 公開（公告）日: 2021-11-26
• 發明（設計）人: 傅玲琳;王彥波;張巧智;李華韜;鄭睿行;張書芬;曹麗麗
• 申請（專利權）人: 浙江工商大學;寧波市產品食品質量檢驗研究院（寧波市纖維檢驗所）
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06;G01N30/34;G01N30/36;G01N30/72
• 代理公司: 廈門創象知識產權代理有限公司 35232
• 代理人: 王鳳玲;尤懷成

本發明公開了一種檢測乳制品中多種晚期糖基化終末產物的方法，其包括：將乳制品離心脫脂后加入同位素內標品，再加入硼酸鹽緩沖液和硼氫化鈉溶液，獲得混合液；將混合液進行酸水解，真空離心濃縮至近干，加水復溶，過濾去除雜質，獲得處理后的乳制品；向處理后的乳制品中加入AGEs以制作各種AGEs標準品，將各標準品與其對應的同位素內標品的積分色譜面積比乘以對應的同位素內標品的濃度作為各標準品濃度的函數來繪制標準曲線；將處理后的乳制品進行UPLC?MS/MS檢測，得到乳制品中AGEs的峰面積，代入標準曲線計算得各AGEs的濃度。從而實現對食品中多種AGEs的含量進行全面準確分析。

技術領域

本發明涉及食品檢測技術領域，具體涉及一種檢測乳制品中多種晚期糖基化終末產物的方法。

背景技術

晚期糖基化終末產物(Advanced glycation end-products，AGEs)是蛋白質、氨基酸、脂類或核酸等物質的游離氨基與還原糖的羰基經過縮合、重排、裂解及氧化修飾等一系列反應后形成的一類穩定終末產物的總稱。目前已經表征和確定的AGEs超過40種，其中在食品中發現的約有15種，包括游離型和肽/蛋白結合型AGEs，有些AGEs如羧甲基賴氨酸(CML)是由賴氨酸衍生而成，而有些AGEs則是經精氨酸修飾產生，或者同時交聯這兩種氨基酸反應得到的。

乳及乳制品以其豐富的營養和獨特的風味，成為人們日常生活主要的營養來源之一。乳制品富含乳糖、乳清蛋白及酪蛋白等組分，在食品加工、儲藏和運輸過程中易發生美拉德反應，形成各類AGEs。

越來越多的證據表明，食源性AGEs的攝入對人體健康有不利影響，并且與糖尿病、慢性腎病等多種慢性疾病密切相關。由于食品基質的復雜性和難處理性，以及AGEs種類繁多，結構復雜等原因，對于食品中AGEs的檢測一直缺少通用、準確、高效的方法。目前食品中AGEs的檢測手段主要有酶聯免疫法、氣相色譜-質譜法、高效液相色譜法、液相色譜串聯質譜法等。其中，酶聯免疫法由于準確度和抗體特異性的限制應用較少；而氣相色譜-質譜法需要對目標進行衍生化，方法比較繁瑣，目標物的回收率不高；液相色譜法雖然儀器普及率較高，操作簡單，但是檢測靈敏度并不理想。

在檢測AGEs時，將液相色譜儀與質譜儀串聯使用，其靈敏度、選擇性和分析速度將會大大提高。但是，相關技術中液相色譜-串聯質譜法(LC-MS/MS)僅能檢測一到三種AGEs產物，且效率較低，難以客觀反映食物中不同AGEs的含量和分布情況。此外，由于質譜定量技術易受樣品基質效應的影響產生誤差，因此在檢測不同基質的樣品時需充分考慮基質效應，以提高結果的準確性。

發明內容

為了解決上述問題，本發明提出一種檢測乳制品中多種晚期糖基化終末產物的方法，該方法可一次性檢測乳制品中11種AGEs，包括羧甲基賴氨酸CML、羧乙基賴氨酸CEL、吡咯素pyrraline、戊糖素pentosidine、甲基乙醛-羥基咪唑酮異構體MG-H1/MG-H2/MG-H3、精嘧啶argpyrimidine、乙二醛-氫咪唑酮G-H1、乙二醛-賴氨酸二聚體GOLD和甲基乙二醛-賴氨酸二聚體MOLD，以實現對食品中各AGEs的含量進行全面準確分析。

為了實現上述目的，本發明的實施例在一方面提出了一種檢測乳制品中多種晚期糖基化終末產物的方法，其包括以下步驟：

(1)將乳制品離心脫脂后加入同位素內標品，再加入硼酸鹽緩沖液和硼氫化鈉溶液，獲得混合液；

(2)將混合液進行酸水解，真空離心濃縮至近干，加水復溶，過濾去除雜質，獲得處理后的乳制品；

(3)向處理后的乳制品中加入AGEs以制作各種AGEs標準品，將各標準品與其對應的同位素內標品的積分色譜面積比乘以對應的同位素內標品的濃度作為各標準品濃度的函數來繪制標準曲線；

(4)將處理后的乳制品進行UPLC-MS/MS檢測，得到乳制品中AGEs的峰面積，代入標準曲線計算得各AGEs的濃度。