[發明專利]一種檢測乳制品中多種晚期糖基化終末產物的方法

在審

• 申請號: 202111058154.2
• 申請日: 2021-09-09
• 公開（公告）號: CN113702546A
• 公開（公告）日: 2021-11-26
• 發明（設計）人: 傅玲琳;王彥波;張巧智;李華韜;鄭睿行;張書芬;曹麗麗
• 申請（專利權）人: 浙江工商大學;寧波市產品食品質量檢驗研究院（寧波市纖維檢驗所）
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06;G01N30/34;G01N30/36;G01N30/72
• 代理公司: 廈門創象知識產權代理有限公司 35232
• 代理人: 王鳳玲;尤懷成

1.一種檢測乳制品中多種晚期糖基化終末產物的方法，其特征在于，包括以下步驟：

(1)將乳制品離心脫脂后加入同位素內標品，再加入硼酸鹽緩沖液和硼氫化鈉溶液，獲得混合液；

(2)將混合液進行酸水解，真空離心濃縮至近干，加水復溶，過濾去除雜質，獲得處理后的乳制品；

(3)向處理后的乳制品中加入AGEs以制作各種AGEs標準品，將各標準品與其對應的同位素內標品的積分色譜面積比乘以對應的同位素內標品的濃度作為各標準品濃度的函數來繪制標準曲線；

(4)將處理后的乳制品進行UPLC-MS/MS檢測，得到乳制品中AGEs的峰面積，代入標準曲線計算得各AGEs的濃度。

2.如權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟(1)中，同位素內標品包括CML-d4、CEL-d4、GOLD-15N2、MG-H1-d3和G-H1-13C2。

3.如權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟(1)中，每毫升乳制品中加入10mL～15mL0.2mol/L pH 9.2的硼酸鹽緩沖液和5mL～8mL 1mol/L用0.1moL/L氫氧化鈉溶液配制的硼氫化鈉溶液，室溫條件下孵育2～4h，獲得混合液。

4.如權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟(2)中，酸水解條件為每毫升乳制品中加入20mL～25mL 6mol/L HCl，110℃酸水解24～25h。

5.如權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟(1)中，所述同位素內標品的濃度為100ng/mL～200ng/mL。

6.如權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟(1)中，離心脫脂的條件為：轉速4500～6000g，溫度0～5℃，時間10～15min。

7.如權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟(2)中，真空離心濃縮條件為：真空度0～1mbar，轉速200～300g，溫度不高于-20℃。

8.如權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟(3)中，CML的標準曲線為Y＝0.01143X+0.000163，CEL的標準曲線為Y＝0.02832X-0.01327，pyrraline的標準曲線為Y＝0.13448X-0.02140，pentosidine的標準曲線為Y＝0.00876X+0.01663，MG-H1/3的標準曲線為Y＝0.00878X-0.00238，MG-H2的標準曲線為Y＝0.00519X-0.00110，argpyrimidine的標準曲線為Y＝0.05723X+0.05402，G-H1的標準曲線為Y＝0.00913X-0.00137，GOLD的標準曲線為Y＝0.01109X-0.00384，MOLD的標準曲線為Y＝0.04551X-0.00447。

9.如權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟(4)中，UPLC條件為：色譜柱：WatersACQUITY HSS T3 100mm×2.1mm 18μm；流動相A：含有0.1％v/v甲酸的水溶液；流動相B：乙腈；柱溫：30℃；流速：0.25mL/min；進樣量：5μL；采用梯度洗脫的方式洗脫樣品，梯度設置為98％A：2％B、95％A：5％B、90％A：10％B、92％A：8％B、98％A：2％B。

10.如權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟(4)中，三重四極桿質譜條件為：離子源：電離子噴霧；掃描方式：正離子模式；檢測模式：MRM；脫溶劑氣溫度：600℃；離子源溫度：120℃；脫溶劑氣流速：1000L/h；進樣錐氣體流速：200L/h；碰撞氣體流速：0.20mL/min；毛細管電壓：600V；碎裂電壓：40V。