[發明專利]一種細胞誘導的方法

在審

• 申請號: 202111052331.6
• 申請日: 2019-01-29
• 公開（公告）號: CN113881624A
• 公開（公告）日: 2022-01-04
• 發明（設計）人: 周琪;李偉;何正泉;王柳
• 申請（專利權）人: 中國科學院動物研究所
• 主分類號: C12N5/077
• 分類號: C12N5/077
• 代理公司: 北京彩和律師事務所 11688
• 代理人: 閆桑田;劉磊

一種細胞誘導的方法，具體來說涉及：誘導成纖維細胞轉分化為脂肪細胞的方法，包括以下步驟：將成纖維細胞培養在培養基中，在培養基中加入Myosin抑制劑和BMP4，繼續培養，直至得到脂肪細胞。還涉及一種誘導成纖維細胞轉化為永生化細胞的方法及其應用。所述方法包括以下步驟：將成纖維細胞培養在培養基中，在培養基中加入Myosin抑制劑，繼續培養，直至得到永生化細胞。還涉及一種誘導肝細胞體外擴增的方法。還涉及Myosin抑制劑尤其是(?)?Blebbistatin或(S)?(?)?Blebbistatin O?Benzoate和通過所述方法獲得的肝細胞在誘導肝細胞體外擴增、構建生物人工肝和構建肝臟疾病模型中的應用。

本案是申請日為2019年1月29日、申請號為201980005643.6、發明 名稱為“一種細胞誘導的方法”的發明專利申請的分案申請。

技術領域

本發明涉及生物技術領域，具體涉及細胞誘導技術領域，更具體涉及 一種誘導成纖維細胞轉分化為脂肪細胞的方法及其應用、一種將成纖維細 胞轉化為永生化細胞的方法及其應用、以及一種誘導肝細胞體外擴增的方 法。

背景技術

轉分化(transdifferentiation，也稱為分化轉移)是指一種類型的分化細胞 轉變成另一種類型的分化細胞的現象。目前已經可以實現多種類型的細胞 的轉分化，例如：將胚胎成纖維細胞、成軟骨細胞和視網膜上皮細胞轉分 化為肌細胞，將B淋巴細胞轉分化為巨噬細胞，將小鼠成纖維細胞轉分化 為功能性的神經細胞等等。

脂肪細胞(adipocyte)在成人體內大量存在，其組織又稱脂肪組織，常呈 白色，在幼兒期大量增殖，到青春期數量達到巔峰，此后數量一般不再增 加。在正常動物和人類的體內，脂肪組織主要存在于腹腔內和腹部的皮下 內，但肥胖患者的機體各個部位均會出現脂肪組織，如腎臟、腸系膜、皮 下、腹腔等部位的周圍，這表明可能分化為脂肪細胞的細胞不僅有脂肪前 體細胞，在一些特定條件下，一些非脂肪前體細胞也能夠分化為脂肪細胞，這顛覆了脂肪細胞是由脂肪前體細胞分化而來的傳統觀念。通過將非脂肪 前體細胞轉分化為脂肪細胞，也可以更清楚地了解脂肪細胞的轉化機制， 進而指導抑制肥胖藥物的開發。

成纖維細胞(fibroblast)是疏松結締組織的主要細胞成分，由胚胎時期的 間充質細胞(mesenchymal cell)分化而來。將成纖維細胞轉分化為脂肪細胞在 諸多領域具有重要的應用，例如，將疤痕傷口中發現的最常見類型的肌成 纖維細胞轉分化為脂肪細胞可能在未來實現傷口不留疤痕，并且在皺紋皮 膚中再生脂肪細胞，有可能衍生出新型抗衰老治療策略。由此可見，實現 非脂肪前體細胞尤其是成纖維細胞轉分化為脂肪細胞具有重要的意義。

目前，現有技術已經公開了一些誘導成纖維細胞轉分化為脂肪細胞的 方法。CN104342401B公開了利用確定的細胞因子組合促進成纖維細胞轉分 化為脂肪細胞的方法，組合物的起效因子為表皮生長因子、肝細胞生長因 子、地塞米松、胰島素和PPARγ激動劑。CN104372024A公開了一種誘導 牛成纖維細胞/成肌細胞轉分化為脂肪細胞的方法，包括克隆牛轉錄因子 CCAAT增強子結合蛋白C/EBPβ基因，構建C/EBPβ基因過表達載體并包裝獲得重組腺病毒，腺病毒侵染牛成纖維細胞、成肌細胞實現上述細胞快 速轉分化為脂肪細胞。上述方法采用大量大分子物質或重編程過程，效率 較低，安全性也存在一定的影響。

現已證實，小分子化合物也可以誘導成纖維細胞轉分化為脂肪細胞， 這能夠提高轉分化的速度、存活率和能力。例如，CN105754935A公開了一 種誘導成纖維細胞轉分化為脂肪細胞的誘導培養基，所述培養基包含基礎 培養基和誘導小分子組合，所述誘導小分子組合為SG或6TF，其中S為 SB431542、G為GSK126、6為E61541、T為苯環丙胺、F為毛喉素。但仍然需要探索更多的小分子化合物來誘導成纖維細胞轉分化為脂肪細胞以用 于疾病的研究、治療和更廣泛的應用。