[發(fā)明專利]一種細(xì)胞誘導(dǎo)的方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 202111052331.6
• 申請日: 2019-01-29
• 公開（公告）號: CN113881624A
• 公開（公告）日: 2022-01-04
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 周琪;李偉;何正泉;王柳
• 申請（專利權(quán)）人: 中國科學(xué)院動物研究所
• 主分類號: C12N5/077
• 分類號: C12N5/077
• 代理公司: 北京彩和律師事務(wù)所 11688
• 代理人: 閆桑田;劉磊

1.(-)-Blebbistatin或(-)-Blebbistatin O-Benzoate在構(gòu)建生物人工肝中的應(yīng)用。

2.(-)-Blebbistatin或(-)-Blebbistatin O-Benzoate在構(gòu)建肝臟疾病模型中的應(yīng)用。

3.一種誘導(dǎo)成纖維細(xì)胞轉(zhuǎn)分化為脂肪細(xì)胞的培養(yǎng)基，其包括：

(-)-Blebbistatin或(-)-Blebbistatin O-Benzoate、BMP4、基礎(chǔ)培養(yǎng)液、胎牛血清和脂肪誘導(dǎo)培養(yǎng)液。

4.如權(quán)利要求3所述的培養(yǎng)基，其中，所述基礎(chǔ)培養(yǎng)液包括高糖DMEM、胎牛血清和雙抗，和/或，所述脂肪誘導(dǎo)培養(yǎng)液包括N2B27培養(yǎng)液(DMEM/F12、Neurobasal的1:1混合物)、N2添加劑、B27添加劑、2％牛血清白蛋白、β-巰基乙醇、Glutamax、胰島素和雙抗，以及血清替代物。

5.如權(quán)利要求3或4任一項(xiàng)所述的培養(yǎng)基，其中，所述脂肪誘導(dǎo)培養(yǎng)液進(jìn)一步包括A83-01和/或SB431542。

6.一種誘導(dǎo)成纖維細(xì)胞轉(zhuǎn)化為永生化細(xì)胞的培養(yǎng)基，其包括：

(-)-Blebbistatin或(-)-Blebbistatin O-Benzoate、基礎(chǔ)培養(yǎng)液、胎牛血清和永生化誘導(dǎo)培養(yǎng)液。

7.如權(quán)利要求6所述的培養(yǎng)基，其中，所述基礎(chǔ)培養(yǎng)液包括高糖DMEM和雙抗，和/或，所述永生化誘導(dǎo)培養(yǎng)液包括N2B27培養(yǎng)液(DMEM/F12、Neurobasal的1:1混合物)、N2添加劑、B27添加劑、2％牛血清白蛋白、β-巰基乙醇、GlutaMAX、胰島素和雙抗。

8.如權(quán)利要求6或7任一項(xiàng)所述的培養(yǎng)基，其中，所述永生化誘導(dǎo)培養(yǎng)液進(jìn)一步包括KOSR、CHIR99021和A83-01中的一種或幾種。

9.基因在制備誘導(dǎo)增殖或衰老的制劑中的應(yīng)用，其特征在于，所述基因包括Sox2、Srrt、Yap、β-catenin、Mki67、Pcna、P19、P16ink4a、P15ink4b、Morf4l1、Elf5中的一種或幾種；優(yōu)選地，增殖相關(guān)基因包括Sox2、Srrt、Yap、β-catenin、Mki67、Pcna中的一種或幾種；優(yōu)選地，衰老相關(guān)基因包括P19、P16ink4a、P15ink4b、Morf4l1、Elf5中的一種或幾種。

10.一種誘導(dǎo)肝細(xì)胞體外擴(kuò)增的方法，其包括以下步驟：將肝細(xì)胞培養(yǎng)在培養(yǎng)基中，在培養(yǎng)基中加入(-)-Blebbistatin或(-)-Blebbistatin O-Benzoate，繼續(xù)培養(yǎng)，從而誘導(dǎo)肝細(xì)胞體外擴(kuò)增。