[發(fā)明專利]一株產(chǎn)纖維素酶的工程菌Oxa-3及其應(yīng)用、酶制劑及其制備方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 202111038765.0
• 申請日: 2021-09-06
• 公開（公告）號: CN113999779A
• 公開（公告）日: 2022-02-01
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 甘禮惠;劉健;龍敏南;溫琳蕊
• 申請（專利權(quán)）人: 廈門大學
• 主分類號: C12N1/15
• 分類號: C12N1/15;C12N15/56;C12N15/80;C12N9/42;C12R1/885
• 代理公司: 廈門加減專利代理事務(wù)所(普通合伙) 35234
• 代理人: 李強;楊澤奇

1.一株產(chǎn)纖維素酶的工程菌Oxa-3(Trichoderma reesei)，其特征在于：其保藏編號為CCTCC NO：M2021845。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的產(chǎn)纖維素酶的工程菌Oxa-3，其特征在于：所述工程菌Oxa-3由xyr1-hph-ace3表達盒轉(zhuǎn)化里氏木霉RUT C-30的原生質(zhì)體得到，所述xyr1-hph-ace3表達盒的基因序列如SEQ ID NO.1所示。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的產(chǎn)纖維素酶的工程菌Oxa-3，其特征在于：所述里氏木霉RUTC-30的保藏編號為ATCC 56765。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的產(chǎn)纖維素酶的工程菌Oxa-3，其特征在于：所述工程菌Oxa-3的構(gòu)建方法包括如下步驟：

A、制備里氏木霉RUT C-30的原生質(zhì)體；

B、在里氏木霉RUT C-30的原生質(zhì)體加入xyr1-hph-ace3片段進行轉(zhuǎn)化,并通過含有潮霉素B的培養(yǎng)基篩選出能夠生長的轉(zhuǎn)化子；

C、將步驟B中篩選得到的轉(zhuǎn)化子分別進行產(chǎn)酶培養(yǎng)，篩選出高產(chǎn)纖維素酶的轉(zhuǎn)化子，即工程菌Oxa-3。

5.一種根據(jù)權(quán)利要求1～4任一項所述的產(chǎn)纖維素酶的工程菌Oxa-3在產(chǎn)纖維素酶中的應(yīng)用。

6.一種酶制劑，其特征在于：采用如權(quán)利要求1～4任一項所述的產(chǎn)纖維素酶的工程菌Oxa-3制得。

7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的酶制劑，其特征在于：采用如權(quán)利要求1～4任一項所述的產(chǎn)纖維素酶的工程菌Oxa-3發(fā)酵液或發(fā)酵液的干燥物作為有效成分。

8.一種根據(jù)權(quán)利要求6或7所述的酶制劑的制備方法，其特征在于，

將工程菌Oxa-3經(jīng)液體發(fā)酵培養(yǎng)得到的含有纖維素酶的發(fā)酵液即為液態(tài)酶制劑；或?qū)⒐こ叹鶲xa-3經(jīng)液體發(fā)酵培養(yǎng)得到的含有纖維素酶的發(fā)酵液干燥，即為固態(tài)酶制劑。

9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的酶制劑的制備方法，其特征在于：所述液體發(fā)酵培養(yǎng)的培養(yǎng)基的配方為微晶纖維素15～25g/L，小麥麩皮粉8～12g/L，胰蛋白胨3～7g/L，KH₂PO₄ 1～4g/L，MgSO₄ 0.2～0.8g/L，CaCl₂ 0.2～0.8g/L，微量元素母液5～15mL，pH為4.5～5.5。

10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的酶制劑的制備方法，其特征在于：在所述液體發(fā)酵培養(yǎng)45～50h后，繼續(xù)按15～25mL/h的速率補充料液，所述料液組分為60～80g/L微晶纖維素和3～8g/L胰蛋白胨。