[發明專利]提高胰高血糖素樣肽六連體在畢赤酵母中表達水平的方法有效
| 申請號： | 202111035939.8 | 申請日： | 2021-09-06 |
| 公開（公告）號： | CN113462713B | 公開（公告）日： | 2021-12-07 |
| 發明（設計）人： | 楊彩峰;王楠;彭華康;郭文芳;王夢琪;李剛強;劉德虎 | 申請（專利權）人： | 中國農業科學院生物技術研究所 |
| 主分類號： | C12N15/81 | 分類號： | C12N15/81;C12N15/16;C12N15/55;C12N15/31;C12N15/67;C12R1/84 |
| 代理公司： | 北京思元知識產權代理事務所(普通合伙) 11598 | 代理人： | 余光軍 |
| 地址： | 100081 北京市海淀*** | 國省代碼： | 北京;11 |
| 權利要求書： | 查看更多 | 說明書： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 提高 血糖 素樣肽六 連體 酵母 表達 水平 方法 | ||
1.一種提高胰高血糖素樣肽六連體在畢赤酵母中表達水平的方法，包括：構建胰高血糖素樣肽六連體基因酵母表達載體；將所構建的胰高血糖素樣肽六連體基因酵母表達載體轉化到宿主畢赤酵母菌株中，誘導胰高血糖素樣肽六連體在宿主畢赤酵母菌株中進行重組表達；其特征在于，在誘導胰高血糖素樣肽六連體在宿主畢赤酵母菌株中進行重組表達時，將宿主畢赤酵母菌株中的GESE基因采用CRISPR/Cas9基因編輯方法敲除；所述的胰高血糖素樣肽六連體基因的核苷酸序列為SEQ ID No.1所示；所述的GESE基因的核苷酸序列為SEQID No.2所示。
2.按照權利要求1所述的方法，其特征在于，所述的宿主畢赤酵母菌株為畢赤酵母表達菌株GS115。
3.按照權利要求1所述的方法，其特征在于，將宿主畢赤酵母菌株中的GESE基因敲除的方法包括：采用CRISPR/Cas9基因編輯方法針對GESE基因的靶序列構建GESE基因編輯載體，將GESE基因編輯載體轉化到含有胰高血糖素樣肽六連體基因的宿主畢赤酵母表達菌株中，將宿主畢赤酵母表達菌株中的GESE基因敲除。
4.一種GESE基因編輯載體，其特征在于，其構建方法包括：根據GESE基因序列設計得到SEQ ID No.3所示的靶位點序列，根據該靶位點序列設計引物進行PCR擴增：將PCR擴增產物與經酶切線性化的CRISPR/Cas9質粒通過同源重組轉化大腸桿菌，挑選陽性菌株得到GESE基因編輯載體；所述的GESE基因的核苷酸序列為SEQ ID No.2所示；所述的引物的核苷酸序列為SEQ ID No.4-SEQ ID No.11所示。
5.權利要求4所述的GESE基因編輯載體在提高胰高血糖素樣肽六連體基因在畢赤酵母中表達水平中的應用；所述的胰高血糖素樣肽六連體基因的核苷酸序列為SEQ ID No.1所示。
6.按照權利要求5所述的應用，其特征在于，包括：構建胰高血糖素樣肽六連體基因酵母表達載體；將胰高血糖素樣肽六連體基因酵母表達載體
該專利技術資料僅供研究查看技術是否侵權等信息，商用須獲得專利權人授權。該專利全部權利屬于中國農業科學院生物技術研究所，未經中國農業科學院生物技術研究所許可，擅自商用是侵權行為。如果您想購買此專利、獲得商業授權和技術合作，請聯系【客服】
本文鏈接：http://www.szxzyx.cn/pat/books/202111035939.8/1.html，轉載請聲明來源鉆瓜專利網。
