[發明專利]極速RNA建庫方法及試劑盒

在審

• 申請號: 202111033722.3
• 申請日: 2021-09-03
• 公開（公告）號: CN113718343A
• 公開（公告）日: 2021-11-30
• 發明（設計）人: 劉娜;江翱;羅元廷;曹振;宋東亮
• 申請（專利權）人: 翌圣生物科技（上海）股份有限公司
• 主分類號: C40B50/06
• 分類號: C40B50/06
• 代理公司: 蘇州根號專利代理事務所(普通合伙) 32276
• 代理人: 朱華慶

1.一種極速RNA建庫方法，其特征在于其步驟包括：

（1）在total RNA中，加入逆轉錄阻礙探針5.8S/18S/28S rRNA probe mix以及隨機引物與total RNA混合后退火，以去除total RNA中的rRNA；

（2）加入逆轉錄酶，以步驟（1）的產物為模板，進行1st cDNA的合成；

（3）使用聚合酶，以步驟（2）合成的1st cDNA為模板合成2nd cDNA，磁珠回收2nd cDNA，得到ds-cDNA；

（4）采用轉座酶Tn5對ds-cDNA進行片段化；

（5）文庫擴增及回收。

2.根據權利要求1所述的極速RNA建庫方法，其特征在于：步驟（1）中的反應體系為total RNA、逆轉錄阻礙探針、隨機引物和DEPC水。

3.根據權利要求2所述的極速RNA建庫方法，其特征在于：步驟（1）中的退火程序為85℃5 min，72℃ 2 min，60℃ 10 min，保存于4℃。

4.根據權利要求1所述的極速RNA建庫方法，其特征在于：步驟（2）中逆轉錄酶為SuperScript? III 逆轉錄酶、SuperScript? II 逆轉錄酶、Hifair? Ⅱ ReverseTranscriptase 、Hifair? IV Reverse Transcriptase的一種或多種。

5.根據權利要求4所述的極速RNA建庫方法，其特征在于：步驟（2）中逆轉錄程序為25℃5 min，42℃ 30 min，85℃ 5 min。

6.根據權利要求1所述的極速RNA建庫方法，其特征在于：步驟（3）中聚合酶是DNAPolymerase I、Taq聚合酶、A家族DNA聚合酶、B家族高保真聚合酶中的一種或者多種。

7.根據權利要求6所述的極速RNA建庫方法，其特征在于：步驟（3）中反應程序是16℃30 min，保存于4℃。

8.一種極速RNA建庫試劑盒，用于權利要求1-7中任一項所述的極速RNA建庫方法，包括：

5.8S/18S/28S rRNA probe mix和隨機引物；

1st cDNA合成酶和1st cDNA反應緩沖液；

2nd cDNA合成酶和2nd cDNA反應緩沖液；

片段化酶轉座酶Tn5和反應緩沖液；

PCR反應試劑。

9.根據權利要求8所述的極速RNA建庫試劑盒，其特征在于：所述1st cDNA合成酶為SuperScript? III 逆轉錄酶、SuperScript? II 逆轉錄酶、Hifair? Ⅱ ReverseTranscriptase 、Hifair? IV Reverse Transcriptase的一種或數種的混合物；所述2ndcDNA合成酶為DNA Polymerase I、Taq聚合酶、A家族DNA聚合酶、B家族高保真聚合酶中的一種或者數種的混合物；所述片段化酶為轉座酶。