[發(fā)明專利]一種TIM-3/CD28融合蛋白及所述融合蛋白修飾的CAR-T細(xì)胞

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 202111027147.6
• 申請日: 2021-09-02
• 公開（公告）號: CN113621077B
• 公開（公告）日: 2023-01-31
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 馬春紅;高立芬;趙松柏;梁曉紅;婁雅琳;劉慧敏;王婷
• 申請（專利權(quán)）人: 山東大學(xué)
• 主分類號: C07K19/00
• 分類號: C07K19/00;C12N5/10;C12N15/867;A61K39/00;A61P35/00;A61P35/02
• 代理公司: 濟(jì)南圣達(dá)知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 37221
• 代理人: 李箏

本發(fā)明具體涉及一種TIM?3/CD28融合蛋白及所述融合蛋白修飾的CAR?T細(xì)胞。現(xiàn)有CAR?T細(xì)胞存在治療效果不理想、持久性較差等缺陷，本發(fā)明為了提供一種治療效果更優(yōu)的CAR?T細(xì)胞，設(shè)計了一種分子轉(zhuǎn)換器T3/28，將TIM?3抑制信號轉(zhuǎn)換成CD28激活信號的，進(jìn)一步提供了一種19BBz?T3/28CAR?T細(xì)胞。經(jīng)驗證，19BBz?T3/28CAR?T細(xì)胞進(jìn)行免疫治療，CAR?T細(xì)胞的陽性率在40％?70％之間，并且在體、內(nèi)外具有理想的腫瘤殺傷能力。19BBz?T3/28CAR?T細(xì)胞可有效延長小鼠的生存期，還能夠持續(xù)性清除不斷回輸?shù)哪[瘤細(xì)胞，具備持續(xù)抑制腫瘤的能力。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于抗腫瘤免疫治療技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種TIM-3/CD28融合蛋白，及包含所述融合蛋白作為嵌合抗原抗體修飾的CAR-T細(xì)胞。

背景技術(shù)

公開該背景技術(shù)部分的信息僅僅旨在增加對本發(fā)明的總體背景的理解，而不必然被視為承認(rèn)或以任何形式暗示該信息構(gòu)成已經(jīng)成為本領(lǐng)域一般技術(shù)人員所公知的現(xiàn)有技術(shù)。

CAR，即嵌合抗原受體技術(shù)，是依據(jù)腫瘤表面腫瘤相關(guān)抗原或者是腫瘤特異性抗原的表達(dá)情況，利用該抗原的相應(yīng)抗體偶聯(lián)一些共刺激分子對T細(xì)胞進(jìn)行特殊的修飾，通過CAR修飾的T細(xì)胞對腫瘤細(xì)胞進(jìn)行有效殺傷的技術(shù)。CAR-T的scFv識別的TAA不依賴于MHC，并且識別的分子可多樣化。CAR的經(jīng)典結(jié)構(gòu)包括位于細(xì)胞內(nèi)部的幾個信號域，以及跨膜部分和細(xì)胞外起主要作用的抗原識別蛋白部分(通常為單鏈抗體scFv片段)。其中，scFv可以使T細(xì)胞選擇性識別腫瘤細(xì)胞，與scFv相連的跨膜區(qū)一般來自CD8或者IgG4，CD3ζ信號分子的ITAM序列可以對T細(xì)胞進(jìn)行有效的激活，提高殺傷功能。第一代CAR-T細(xì)胞胞內(nèi)只有CD3ζ，僅具有部分持續(xù)性和殺傷能力，因此在臨床患者體內(nèi)并沒有發(fā)生反應(yīng)。二代CAR在一代CAR的基礎(chǔ)上多了一個共刺激分子，比如OX40(CD134)、CD28、4-1BB(CD137)、CD27。共刺激信號分子的加入，促進(jìn)了CAR-T細(xì)胞在體內(nèi)的增殖與生存能力。單獨的CD3ζ結(jié)構(gòu)并不能夠促進(jìn)T細(xì)胞增殖和細(xì)胞因子的釋放，不過在共刺激因子的協(xié)助下這一現(xiàn)象就會大大改善，二者協(xié)同可以激活CAR-T細(xì)胞信號，延長CAR-T細(xì)胞的生存期，提高CAR-T細(xì)胞的細(xì)胞毒性。與CD28相比，4-1BB能夠增強(qiáng)CAR-T細(xì)胞的持久性功能，避免過早耗竭，不過使用CD28的CAR-T細(xì)胞比含4-1BB的CAR-T細(xì)胞具有更強(qiáng)的細(xì)胞因子釋放能力。盡管CD28的CAR-T細(xì)胞初期具有強(qiáng)勁的增殖能力，但缺少持續(xù)性殺傷能力。第三代CAR-T療法在CAR上增加了兩個共刺激結(jié)構(gòu)域，然而，一些研究表明多個共刺激結(jié)構(gòu)域并不能增強(qiáng)T細(xì)胞功效。

近年來針對CD19抗原來治療難治愈易復(fù)發(fā)的慢性淋巴細(xì)胞白血病(CLL)和急性淋巴細(xì)胞白血病(ALL)的CAR-T技術(shù)取得了很大的成功，目前針對CD19抗原的已經(jīng)上市的CAR-T細(xì)胞產(chǎn)品已經(jīng)獲批了三種，分別是Kite(吉利德)的Yescarta、諾華的Kymriah和吉利德的Tecartus，臨床數(shù)據(jù)顯示總緩解率不低于80％。目前國內(nèi)針對CD19靶點的臨床試點較多，其CAR-T生產(chǎn)工藝與治療方案參差不齊，存在復(fù)發(fā)率相當(dāng)高的問題。另外由于CAR-T細(xì)胞毒性較弱，效果不明顯和完全沒反應(yīng)的病例也非常多。所以需要對傳統(tǒng)的二代CAR進(jìn)行改造和優(yōu)化，以便于解決CAR-T細(xì)胞毒性低、脫靶、特異性低下等問題。