[發明專利]一種用于促進外傷愈合的臍帶間充質干細胞外用凝膠、給藥方法和應用

在審

• 申請號: 202111011722.3
• 申請日: 2021-08-31
• 公開（公告）號: CN113842398A
• 公開（公告）日: 2021-12-28
• 發明（設計）人: 陳曉波;方芳;胡學鑫;韓洪起;韓顥;馮春玲;吳學濤
• 申請（專利權）人: 優賽生命科學發展有限公司
• 主分類號: A61K35/28
• 分類號: A61K35/28;A61K9/06;A61K47/36;C12N5/0775;A61P17/02;A61P29/00;A61K31/734
• 代理公司: 天津盛理知識產權代理有限公司 12209
• 代理人: 韓曉梅

本發明公開了一種用于促進外傷愈合的臍帶間充質干細胞外用凝膠，制備步驟如下：通過對復蘇的臍帶間充質干細胞傳代培養，并進行富集濃縮的方法，獲得高濃度的具有生物活性的臍帶間充質干細胞；配合海藻酸鈉凝膠聯合制備，獲得具有高度穩定性、滲透性的臍帶間充質干細胞凝膠。本發明凝膠通過體外對局部傷處進行涂抹的方式，促進傷處細胞生長，同時避免了細菌侵入，降低感染的可能性，為傷處提供有利于組織生長的微環境，從而促進外傷愈合、縮短治療時間，減少傷者痛苦。使用操作簡單、成品便于保存，降低傷者治療成本，提高治療效果。

技術領域

本發明屬于生物技術領域，尤其是一種用于促進外傷愈合的臍帶間充質干細胞外用凝膠、給藥方法和應用。

背景技術

外傷是正常皮膚或組織在外界致傷因子如外科手術、外力、熱、電流、化學物質、低溫及機體內在因素如局部血液供應障礙等作用下所導致的損害。常伴有皮膚完整性的破壞以及一定量正常組織的缺失及皮膚正常功能受損。外傷愈合是一個動態、復雜有序的過程，包括①凝血期：外傷形成瞬間開始的機體首先出現的止血反應；②炎癥期：由于局部血管收縮導致的的組織缺血，引起血管活性物質的釋放，以及一些可能的致病微生物的存在引起的機體防御反應；③修復期：基底細胞增殖，刺激毛細血管和結締組織的反應性增生，巨噬細胞釋放生長因子如血小板衍生生長因子(PDGF)、β轉型生長因子(β-TGF)、也α轉型生長因子(α-TGF)加速肉芽組織形成。外傷愈合過程中，若某一階段失控，則會導致組織損傷無法得到正常的修復，形成難愈性創面，而難愈性創面的形成，常伴隨基礎性疾病的存在。

1988年，第一例胚胎干細胞臨床應用取得效果，但其細胞來源困難，不易于獲得；1995年，第一例臍帶間充質干細胞療法進入臨床應用。20多年的發展歷程，臍帶間充質干細胞因其多向分化潛能、免疫調節功能、旁分泌效應，成為干細胞治療的首選。其來源廣泛，取材方便，通過建立高效分離、培養、擴增的方法，可獲得大量種子細胞，-196℃液氮罐中可長期保存且無免疫原性。

研究發現，創傷的刺激及局部創面的微環境中含有的各種不同的細胞因子可能具有促進臍帶間充質干細胞趨化及誘導其向所需要的組織和細胞分化來參與組織的修復；同時，局部創傷的微環境刺激臍帶間充質干細胞分泌產生血管內皮生長因子、表皮生長因子等來促進傷處血管形成，皮損修復，以行使其功能。海藻酸鈉凝膠的存在，促進有效成分滲透吸收，維持局部環境穩定性，降低傷處感染風險。

目前針對外傷的外用藥其藥效較為固定，不能夠針對不同類型、不同程度的外傷進行針對性的治療，間充質干細胞作為活細胞，其最大的優勢在于能夠根據外傷部位的局部微環境有針對性的分泌各種活性物質，達到降低局部炎性反應、促進傷口愈合及血管新生等。而海藻酸鈉及丙二醇的加入為間充質干細胞提供了一個能夠長期在傷口處附著并存活的環境，并促進干細胞分泌因子的透皮吸收，從而提升治療效果。

通過檢索，尚未發現與本發明專利申請相關的專利公開文獻。

發明內容

本發明目的在于克服現有技術中的不足之處，提供一種用于促進外傷愈合的臍帶間充質干細胞外用凝膠、給藥方法和應用。

本發明解決其技術問題所采用的技術方案是：

一種用于促進外傷愈合的臍帶間充質干細胞外用凝膠，制備步驟如下：

(1)將體外分離獲得的間充質干細胞以原代培養基進行細胞培養，37℃、5％CO₂培養，3-4小時后翻面，使培養基浸潤細胞，繼續培養P0代細胞7-10天；

(2)細胞融合度達到50％-70％，質量濃度0.9％氯化鈉注射液清洗細胞一次，加入胰酶消化液使細胞從培養瓶底部脫落；300-500g離心5-8分鐘，去上清，細胞沉淀用培養基重懸，過濾，計數，根據計數結果按照4-6×10³/cm²接種于細胞培養瓶或細胞培養皿中，補加完全培養基后放入37℃，5％CO₂培養箱中繼續培養P1代細胞；