[發明專利]一種無支架牙周膜干細胞球及其制備方法與應用在審
| 申請號： | 202111009287.0 | 申請日： | 2021-08-31 |
| 公開（公告）號： | CN113755481A | 公開（公告）日： | 2021-12-07 |
| 發明（設計）人： | 陳靜;劉月華 | 申請（專利權）人： | 上海市口腔醫院（上海市口腔健康中心） |
| 主分類號： | C12N11/10 | 分類號： | C12N11/10;C12N11/04;C12N5/0775;A61L27/38 |
| 代理公司： | 上海科盛知識產權代理有限公司 31225 | 代理人： | 褚明偉 |
| 地址： | 200000 *** | 國省代碼： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 支架 牙周膜 干細胞 及其 制備 方法 應用 | ||
1.一種無支架牙周膜干細胞球的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：
(1)制備細胞球培養板：配置瓊脂糖溶液加入到二維細胞培養六孔板的孔中，將模具放置在六孔板的瓊脂糖溶液內，待瓊脂糖溶液凝固后拔出模具，使得瓊脂糖凝膠中形成井孔，即得到細胞球培養板；
(2)井孔潤洗：用PBS潤洗細胞球培養板的每個井孔；
(3)牙周膜干細胞接種：將牙周膜干細胞細胞懸液加入細胞球培養板的井孔中，井孔中加入培養液，然后將細胞球培養板放入細胞培養箱中；
(4)無支架牙周膜干細胞球培養：培養1天后，更換培養液，以后每隔2天換一次培養液；
(5)利用顯微鏡觀察其生長狀況，待形成無支架牙周膜干細胞球后進行收集。
2.根據權利要求1所述的一種無支架牙周膜干細胞球的制備方法，其特征在于，步驟(1)中，配置瓊脂糖溶液并加熱，待瓊脂糖溶液為液體狀態時將模具沿著一側孔邊緣向另一側邊緣緩緩放入；待瓊脂糖溶液凝固成形后，垂直拔出模具。
3.根據權利要求1所述的一種無支架牙周膜干細胞球的制備方法，其特征在于，步驟(1)中，所述瓊脂糖溶液中瓊脂糖與去離子水的質量比為1：100。
4.根據權利要求1所述的一種無支架牙周膜干細胞球的制備方法，其特征在于，步驟(1)中，制備細胞球培養板的過程保證無菌；制備得到的細胞球培養板井孔保持深度一致。
5.根據權利要求1所述的一種無支架牙周膜干細胞球的制備方法，其特征在于，步驟(2)中，在接種細胞之前，在細胞球培養板每井孔中加入至少1mlPBS溶液進行潤洗。
6.根據權利要求1所述的一種無支架牙周膜干細胞球的制備方法，其特征在于，步驟(3)中，每井孔接種牙周膜干細胞1.0×103個～1.5×103個。
7.根據權利要求1所述的一種無支架牙周膜干細胞球的制備方法，其特征在于，步驟(4)中，所述更換培養液的方式為半換液方式及沿培養板側壁吸取培養液。
8.根據權利要求1所述的一種無支架牙周膜干細胞球的制備方法，其特征在于，步驟(5)中，無支架牙周膜干細胞球收集過程中，用槍頭吸取PBS液體進行吹吸，將含有細胞球的PBS液體放入離心管中，靜置一段時間后，棄上清得到細胞球；或者通過小于細胞球直徑的細胞篩收集無支架牙周膜干細胞球。
9.一種無支架牙周膜干細胞球，其特征在于，所述無支架牙周膜干細胞球通過權利要求1-8任一所述方法制備得到。
10.一種如權利要求9所述的無支架牙周膜干細胞球的應用，其特征在于，所述無支架牙周膜干細胞球應用于組織工程領域。
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