[發明專利]一種基于等溫擴增技術鑒定微球菌的引物、探針和試劑盒及其應用有效
| 申請號： | 202110999845.6 | 申請日： | 2021-08-30 |
| 公開（公告）號： | CN113444826B | 公開（公告）日： | 2021-11-30 |
| 發明（設計）人： | 不公告發明人 | 申請（專利權）人： | 至善時代智能科技（北京）有限公司;至微生物智能科技（廈門）有限公司 |
| 主分類號： | C12Q1/689 | 分類號： | C12Q1/689;C12Q1/6844;C12Q1/04;C12N15/11 |
| 代理公司： | 北京高沃律師事務所 11569 | 代理人： | 薛紅凡 |
| 地址： | 102629 北京市大興區中關村科技園區*** | 國省代碼： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 基于 等溫 擴增 技術 鑒定 球菌 引物 探針 試劑盒 及其 應用 | ||
【權利要求書】：
1.一種基于等溫擴增技術鑒定環境中微球菌的方法，其特征在于，包括以下步驟：
1）采集環境樣品后，培養獲得待檢測菌液；
2）以提取檢測菌液的基因組DNA為模板，在鑒定微球菌屬的引物探針組中的引物和探針的作用下進行等溫擴增，采集實時熒光信號，得到熒光擴增曲線；
所述引物探針組，包括引物和標記有熒光基團和淬滅基團的探針；
所述探針的核苷酸序列如SEQIDNO:3所示；
所述引物包括核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示的正向引物和核苷酸序列如SEQIDNO:2所示的反向引物；
所述等溫擴增的反應體系如下：
recA重組酶蛋白2 ~ 3μg
SSB蛋白1.5 ~ 2μg
BsuDNA聚合酶0.5 ~ 1μg
核酸外切酶III 0.8 ~ 1.6U
2×反應緩沖液10μL
10μM正向引物/10μM反向引物0.8μL/0.8μL
5μM探針0.5μL
DNA模板2μL
ddH2O補足至20μl；
3）根據所述熒光擴增曲線判斷環境樣品中是否含有微球菌；
陰性樣品和陽性樣品判定標準：熒光閾值設定為0.3，當Ct值＞39時，判定為陰性樣品，
當Ct值≤39時，判定為陽性樣品。
2.根據權利要求1所述方法，其特征在于，所述等溫擴增的反應程序如下：在39℃下保持35s，重復40個循環。
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