[發(fā)明專利]用于γδT的細胞擴增培養(yǎng)基、組合產(chǎn)品及其培養(yǎng)方法

有效

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• 申請日: 2021-08-27
• 公開（公告）號: CN113684179B
• 公開（公告）日: 2022-06-10
• 發(fā)明（設計）人: 李光超;羅敏;丁雯;陳卓瑩
• 申請（專利權）人: 廣州百暨基因科技有限公司
• 主分類號: C12N5/0783
• 分類號: C12N5/0783
• 代理公司: 華進聯(lián)合專利商標代理有限公司 44224
• 代理人: 林青中

本發(fā)明涉及用于γδT的細胞擴增培養(yǎng)基、組合產(chǎn)品及其培養(yǎng)方法。所述γδT細胞擴增培養(yǎng)基包括基礎培養(yǎng)基以及附加組分，所述附加組分包括：5％～15％(v/v)FBS、IL2 200IU/mL～800IU/mL、IL21 1ng/mL～20ng/mL以及輔酶Q10 5μmol/L～20μmol/L。與傳統(tǒng)方法相比，本發(fā)明能顯著提高γδT細胞的擴增效率和細胞純度，培養(yǎng)得到大量高純度的γδT細胞，還能夠有效維持γδT細胞對腫瘤細胞的殺傷活性。γδT細胞經(jīng)過基因工程手段修飾表達嵌合性抗原受體后可用于于異體回輸，不產(chǎn)生移植物抗宿主病，因而具有更為廣泛的應用前景。

技術領域

本發(fā)明涉及細胞培養(yǎng)技術領域，具體而言，涉及用于γδT的細胞擴增培養(yǎng)基、組合產(chǎn)品及其培養(yǎng)方法。

背景技術

根據(jù)TCR受體的不同，可將T細胞分為αβT細胞和γδT細胞。其中，αβT細胞占T細胞總數(shù)的95％以上，γδT細胞則至占T細胞總數(shù)的1-5％，且主要分布于黏膜相關淋巴組織中。γδT細胞是一種既能殺傷癌細胞，腫瘤干細胞，又能識別癌抗原的免疫細胞。γδT細胞雖然所占比例低，但對來自39個惡性腫瘤的約18000個人類腫瘤表達特征的薈萃分析表明，腫瘤內γδT細胞的表達是對生存率最有利的預后指標之一。另外，各種研究表明，γδT細胞能識別腫瘤細胞并對其有殺傷作用。

多種常見的抗原被用來刺激γδT細胞的擴增，例如異戊烯基焦磷酸酯(IPP)、(E)4羥基3甲基但2烯基焦磷酸酯(HMBPP)、唑來膦酸鹽(Zometa)和溴水蛋白焦磷酸酯(BrHPP)，而唑來膦酸是被廣泛使用刺激γδT細胞擴增。傳統(tǒng)方法是在PBMC的培養(yǎng)基加入唑來膦酸和IL2，這種方法能得到純度較高的γδT，但其缺點是不能得到大量的γδT細胞，導致難以運用在臨床治療上。

有鑒于此，特提出本發(fā)明。

發(fā)明內容

本發(fā)明的第一目的在于提供一種γδT細胞擴增培養(yǎng)基，包括基礎培養(yǎng)基以及附加組分，所述附加組分包括：

5％～15％(v/v)FBS、IL2 200IU/mL～800IU/mL、IL21 1ng/mL～20ng/mL以及輔酶Q10 5μmol/L～20μmol/L。

可選的，如上所述的γδT細胞擴增培養(yǎng)基，所述附加組分包括：

7％～13％(v/v)FBS、IL2 400IU/mL～600IU/mL、IL21 7ng/mL～13ng/mL以及輔酶Q10 7μmol/L～13μmol/L。

可選的，如上所述的γδT細胞擴增培養(yǎng)基，所述附加組分還包括維生素C。

可選的，如上所述的γδT細胞擴增培養(yǎng)基，所述維生素C濃度為5μmol/L～20μmol/L。

可選的，如上所述的γδT細胞擴增培養(yǎng)基，所述基礎培養(yǎng)基為Optivitro培養(yǎng)基。

本發(fā)明的第二目的在于提供一種組合產(chǎn)品，包括如上所述的γδT細胞擴增培養(yǎng)基以及γδT細胞激活培養(yǎng)基；

所述γδT細胞激活培養(yǎng)基包括5％～15％(v/v)FBS、IL2 200IU/mL～800IU/mL、IL21 1ng/mL～20ng/mL以及雙膦酸鹽1μM～10μM。

可選的，如上所述的組合產(chǎn)品，所述雙膦酸鹽包括唑來膦酸、依替膦酸、伊班膦酸、帕米膦酸、阿侖膦酸、利塞膦酸、米羅磷酸中的一種或多種。

本發(fā)明的第三目的在于提供一種γδT細胞培養(yǎng)方法，其包括：

b)將γδT細胞用如上所述的γδT細胞擴增培養(yǎng)基進行培養(yǎng)。

可選的，如上所述的培養(yǎng)方法，在b)之前還包括步驟a)：用如上所述γδT細胞激活培養(yǎng)基對γδT細胞進行預培養(yǎng)。