[發(fā)明專利]用于γδT的細(xì)胞擴(kuò)增培養(yǎng)基、組合產(chǎn)品及其培養(yǎng)方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 202110997464.4
• 申請日: 2021-08-27
• 公開（公告）號: CN113684179B
• 公開（公告）日: 2022-06-10
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 李光超;羅敏;丁雯;陳卓瑩
• 申請（專利權(quán)）人: 廣州百暨基因科技有限公司
• 主分類號: C12N5/0783
• 分類號: C12N5/0783
• 代理公司: 華進(jìn)聯(lián)合專利商標(biāo)代理有限公司 44224
• 代理人: 林青中

1.殺傷活性調(diào)高的γδT細(xì)胞培養(yǎng)方法，其特征在于，包括：

b）將γδT細(xì)胞用γδT細(xì)胞擴(kuò)增培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)；

所述γδT細(xì)胞擴(kuò)增培養(yǎng)基由基礎(chǔ)培養(yǎng)基以及附加組分組成，所述附加組分的組成如下：5%~15%（v/v） FBS、IL2 200 IU/mL~800 IU/mL、IL21 1ng/mL~20ng/mL、輔酶Q10 5μmol/L~20μmol/L和維生素C 5μmol/L~20μmol/L。

2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的培養(yǎng)方法，其特征在于，所述附加組分的組成如下：7%~13%（v/v） FBS、IL2 400 IU/mL ~ 600 IU/mL、IL21 7ng/mL~13ng/mL以及輔酶Q10 7μmol/L~13μmol/L。

3.根據(jù)權(quán)利要求1或者2所述的培養(yǎng)方法，其特征在于，所述基礎(chǔ)培養(yǎng)基為Optivitro培養(yǎng)基。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的培養(yǎng)方法，其特征在于，在b）之前還包括步驟a）：用γδT細(xì)胞激活培養(yǎng)基對γδT細(xì)胞進(jìn)行預(yù)培養(yǎng)；

所述γδT細(xì)胞激活培養(yǎng)基的組成為：5%~15%（v/v） FBS、IL2 200 IU/mL ~ 800 IU/mL、IL21 1 ng/mL ~ 20 ng/mL以及雙膦酸鹽 1μM ~ 10μM。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的培養(yǎng)方法，其特征在于，所述雙膦酸鹽包括唑來膦酸、依替膦酸、伊班膦酸、帕米膦酸、阿侖膦酸、利塞膦酸、米羅磷酸中的一種或多種。

6.根據(jù)權(quán)利要求4所述的培養(yǎng)方法，其特征在于，所述預(yù)培養(yǎng)的細(xì)胞為外周血單個(gè)核細(xì)胞，接種密度為（2~3）×10⁶/mL。

7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的培養(yǎng)方法，其特征在于，所述預(yù)培養(yǎng)的時(shí)間為2~4天。

8.根據(jù)權(quán)利要求1、2以及4~7任一項(xiàng)所述的培養(yǎng)方法，其特征在于，步驟b）起始培養(yǎng)的細(xì)胞接種密度為（1~2）×10⁶/mL。

9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的培養(yǎng)方法，其特征在于，在步驟b）中，每隔2~3天對細(xì)胞進(jìn)行換液。

10.權(quán)利要求1~9任一項(xiàng)所述的方法在制備嵌合性抗原受體γδT細(xì)胞中的應(yīng)用。