[發(fā)明專利]一種評估實(shí)體腫瘤Claudin18.2蛋白表達(dá)的方法和應(yīng)用

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• 申請日: 2021-08-27
• 公開（公告）號: CN113687085A
• 公開（公告）日: 2021-11-23
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 樊嘉;周儉;施國明;郭曉軍;黃曉勇;楊國歡;高超;陸佳成;孟獻(xiàn)龍;裴晏梓;柯愛武
• 申請（專利權(quán)）人: 復(fù)旦大學(xué)附屬中山醫(yī)院
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68;G01N33/58;G01N33/577;G01N33/574
• 代理公司: 上海伯瑞杰知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 31227
• 代理人: 周一新

本發(fā)明公開了一種評估實(shí)體腫瘤Claudin18.2蛋白表達(dá)的方法和應(yīng)用，屬于生物醫(yī)學(xué)檢測領(lǐng)域。該評估方法包括：根據(jù)待檢測實(shí)體腫瘤組織類型挑選標(biāo)本庫中Claudin18.2不同表達(dá)水平的組織切片作為對照，利用免疫組織化學(xué)染色檢測待檢組織切片與對照切片中Claudin18.2蛋白表達(dá)，通過比對對照切片染色結(jié)果進(jìn)行免疫組化質(zhì)控并準(zhǔn)確評估待檢腫瘤組織中Claudin18.2蛋白的表達(dá)水平。該方法為實(shí)體腫瘤Claudin18.2蛋白檢測提供高靈敏度、高特異性和標(biāo)準(zhǔn)化的評判標(biāo)準(zhǔn)，可準(zhǔn)確評估不同患者實(shí)體腫瘤組織Claudin18.2的表達(dá)水平，可用于篩選治療實(shí)體腫瘤的靶向Claudin18.2藥物。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于生物醫(yī)學(xué)檢測領(lǐng)域，具體涉及一種評估實(shí)體腫瘤Claudin18.2蛋白表達(dá)的方法和應(yīng)用。

背景技術(shù)

Claudins是一個(gè)緊密連接蛋白質(zhì)家族，其中Claudin18.2是一種胃特異性亞型，高度選擇性表達(dá)于人正常胃粘膜上皮，但通常埋藏在胃粘膜中，正常情況下Claudin18.2單克隆抗體難以結(jié)合Claudin18.2的位點(diǎn)。近期研究表明，Claudin18.2在胃癌、胰腺癌和膽管癌等實(shí)體腫瘤中存在不同程度的表達(dá)，且實(shí)體腫瘤會破壞緊密連接結(jié)構(gòu)，導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞的Claudin18.2表位暴露，使Claudin18.2成為實(shí)體腫瘤潛在的治療靶點(diǎn)。以Claudin18.2為靶點(diǎn)的抗腫瘤藥物陸續(xù)在不同類型晚期實(shí)體腫瘤中開展早期臨床研究，但目前尚無評估實(shí)體腫瘤中Claudin18.2表達(dá)的有效手段，迫切需要開發(fā)一種能夠快速、便捷且準(zhǔn)確地評估實(shí)體腫瘤中Claudin18.2蛋白表達(dá)的檢測方法。

免疫組織化學(xué)是利用抗體特異性結(jié)合抗原的特性，通過抗體上標(biāo)記物的顯色部位及強(qiáng)度，來檢測組織或細(xì)胞中某種蛋白質(zhì)的定位和表達(dá)強(qiáng)度的技術(shù)，是檢測實(shí)體腫瘤Claudin18.2表達(dá)的可靠方法。但免疫組化檢測存在一定的假陽性、假陰性，同一組織相同抗原在不同批次實(shí)驗(yàn)中的結(jié)果可能存在差異。因此，需要優(yōu)化現(xiàn)有免疫組化技術(shù)及評估手段，提高免疫組化檢測的穩(wěn)定性和準(zhǔn)確性，用于篩選Claudin18.2陽性表達(dá)實(shí)體腫瘤，服務(wù)于靶向Claudin18.2治療。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的主要目的是提供一種能夠快速、準(zhǔn)確且穩(wěn)定地評估實(shí)體腫瘤Claudin18.2蛋白表達(dá)的方法。

本發(fā)明的另一目的是提供上述評估實(shí)體腫瘤Claudin18.2蛋白表達(dá)的方法在以Claudin18.2蛋白為靶點(diǎn)的抗腫瘤藥物篩選中的應(yīng)用。

為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用如下技術(shù)方案：

本發(fā)明提供了Claudin18.2蛋白在制備實(shí)體腫瘤診斷或預(yù)后評估的試劑盒中的應(yīng)用。

優(yōu)選地，所述試劑盒以Claudin18.2蛋白作為診斷或預(yù)后評估的標(biāo)記物。

優(yōu)選地，所述實(shí)體腫瘤包括上皮來源的實(shí)體腫瘤。

優(yōu)選地，所述試劑盒是通過免疫組化染色技術(shù)體外檢測實(shí)體腫瘤患者的手術(shù)切除組織中Claudin18.2蛋白的表達(dá)情況。

優(yōu)選地，所述試劑盒包括如下試劑：

試劑A:Claudin18.2單克隆抗體×1；

試劑B:HRP標(biāo)記的IgG二抗×1；

試劑C:PBS緩沖液×1；

試劑D:抗原修復(fù)液×1；

試劑E:3％過氧化氫溶液×1；

試劑F:山羊血清封閉液×1；

試劑G:DAB濃縮液×1；

試劑H:DAB緩沖液×1；

試劑I:蘇木素染液×1；