[發明專利]一種評估實體腫瘤Claudin18.2蛋白表達的方法和應用

在審

• 申請號: 202110996155.5
• 申請日: 2021-08-27
• 公開（公告）號: CN113687085A
• 公開（公告）日: 2021-11-23
• 發明（設計）人: 樊嘉;周儉;施國明;郭曉軍;黃曉勇;楊國歡;高超;陸佳成;孟獻龍;裴晏梓;柯愛武
• 申請（專利權）人: 復旦大學附屬中山醫院
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68;G01N33/58;G01N33/577;G01N33/574
• 代理公司: 上海伯瑞杰知識產權代理有限公司 31227
• 代理人: 周一新

1.Claudin18.2蛋白在制備實體腫瘤診斷或預后評估的試劑盒中的應用。

2.根據權利要求1所述的應用，其特征在于，所述試劑盒以Claudin18.2蛋白作為診斷或預后評估的標記物。

3.根據權利要求1所述的應用，其特征在于，所述實體腫瘤包括上皮來源的實體腫瘤。

4.根據權利要求1至3任一項所述的應用，其特征在于，所述試劑盒是通過免疫組化染色技術體外檢測實體腫瘤患者手術切除組織中Claudin18.2蛋白的表達情況。

5.根據權利要求4所述的應用，其特征在于，所述試劑盒包括如下試劑：

試劑A:Claudin18.2單克隆抗體×1；

試劑B:HRP標記的IgG二抗×1；

試劑C:PBS緩沖液×1；

試劑D:抗原修復液×1；

試劑E:3％過氧化氫溶液×1；

試劑F:山羊血清封閉液×1；

試劑G:DAB濃縮液×1；

試劑H:DAB緩沖液×1；

試劑I:蘇木素染液×1；

其中，所述Claudin18.2單克隆抗體可以特異性結合實體腫瘤細胞上的Claudin18.2抗原。

6.根據權利要求5所述的應用，其特征在于，所述免疫組化染色技術包括脫蠟、抗原修復、內源性過氧化物酶失活、封閉、一抗孵育、二抗孵育、DAB顯色、復染、脫水、封片和鏡檢的步驟。

7.一種評估實體腫瘤Claudin18.2蛋白表達的方法，其特征在于，包括以下步驟：

(1)將Claudin18.2蛋白的質控、高表達、低表達、中表達和陰性對照切片，與實體腫瘤的待檢測切片一起進行免疫組化染色，鏡下觀察并機器采集圖像；

(2)采用免疫組化分析軟件分析上述圖像，如所述Claudin18.2蛋白質控對照切片、陰性對照切片的染色無假陽性或假陰性，用上述軟件分別獲取待檢測切片和上述質控、高表達、低表達、中表達和陰性的對照切片Claudin18.2蛋白染色的平均灰度值作為強度指標，陽性細胞比例作為占比指標，

(3)結合步驟(2)中強度指標按照如下標準進行打分，具體為：待檢測切片的染色強度以對照切片的平均灰度值為判定標準，0表示待檢測切片平均灰度值低表達對照切片平均灰度值；1+表示低表達對照切片平均灰度值≤待檢測切片平均灰度值中表達對照切片平均灰度值；2+表示中表達對照切片平均灰度值≤待檢測切片平均灰度值高表達對照切片平均灰度值；3+表示待檢測切片平均灰度值≥高表達對照切片平均灰度值；

同時使用免疫組化分析軟件如Image J獲取待檢測切片的陽性細胞占比值，綜合待檢測切片的強度指標和占比指標進行Claudin18.2蛋白表達結果判定，標準為：

若待檢測切片的染色強度≥2+，且陽性細胞占比≥40％，認為實體腫瘤細胞膜中Claudin18.2蛋白呈陽性；

若待檢測切片的染色強度2+，或陽性細胞占比40％，認為實體腫瘤細胞膜中Claudin18.2蛋白呈陰性。

8.根據權利要求7所述評估實體腫瘤Claudin18.2蛋白表達的方法，其特征在于，

所述Claudin18.2蛋白質控對照切片含有人正常胃粘膜上皮組織切片；

所述Claudin18.2蛋白高表達對照切片為Claudin18.2蛋白染色的平均灰度值接近參照樣本最高灰度值70％對應的實體腫瘤組織切片；

所述Claudin18.2蛋白中表達對照切片為Claudin18.2蛋白染色的平均灰度值接近參照樣本最高灰度值40％對應的實體腫瘤組織切片；

所述Claudin18.2蛋白低表達對照切片為Claudin18.2蛋白染色的平均灰度值接近參照樣本最高灰度值10％對應的實體腫瘤組織切片；

所述Claudin18.2蛋白陰性對照切片為參照樣本中Claudin18.2蛋白染色的平均灰度值最低對應的實體腫瘤組織切片；

其中，所述參照樣本為待檢測實體腫瘤組織標本庫中100例以上不同病人來源的腫瘤組織切片或組織芯片。