[發明專利]利用白酒丟糟生產L-乳酸的方法

有效

• 申請號: 202110994041.7
• 申請日: 2021-08-27
• 公開（公告）號: CN113621674B
• 公開（公告）日: 2022-06-21
• 發明（設計）人: 雷翔云;鄧波;熊燕飛;李勇;敖靈;丁海龍;彭遠松;馬卓;宋川
• 申請（專利權）人: 瀘州老窖股份有限公司
• 主分類號: C12P39/00
• 分類號: C12P39/00;C12P19/02;C12P7/56;C12N1/20;C12N1/14;C12N1/02;C12R1/685;C12R1/785;C12R1/885;C12R1/07
• 代理公司: 成都虹橋專利事務所(普通合伙) 51124
• 代理人: 羅貴飛

1.利用白酒丟糟生產L-乳酸的方法，其特征在于包括如下步驟：

A.超微粉碎：將浸潤后的丟糟濕法粉碎至200-250目，過濾得到粉碎丟糟；

B.將聚乙二醇與混合菌酶液按0.004-0.005∶1g/ml的比例混合，得到混合液；

C.將步驟A得到的粉碎丟糟與步驟B得到的混合液按照1∶8-10g/ml的比例混合酶解后，抽濾得到初糖液，將初糖液減壓蒸發至還原糖濃度為60-65g/L，得到濃糖液；

D.調節濃糖液pH為6.5-7.0，然后按質量體積比添加酵母粉0.6-0.8％，蛋白胨0.8-1.0％，K₂HPO₄0.2-0.25％，CaCO₃5-6％混合后滅菌得到濃糖液培養基，然后將凝結芽孢桿菌種子液接種至濃糖液培養基中，充分發酵，得到L-乳酸；

步驟B中所述的混合菌酶液的制備方法，包括如下步驟：

a.分別從窖泥、丟糟、酒廠周邊環境土壤中取樣，用以白酒丟糟為碳源的篩選培養基進行篩選富集，經分離純化后得到菌樣；將菌樣活化后，采用固體發酵培養基進行發酵培養，活化菌樣的接種量為固體發酵培養基的9-11％，然后將其浸提，抽濾，離心后得到菌酶液A，將菌酶液A用于白酒丟糟的酶解，篩選得到H菌，經發酵制得H菌酶液，H菌酶液酶活為5.0-5.8IU/ml；

b.分別從窖泥、丟糟、酒廠周邊環境土壤中取樣，用以H菌酶液酶解后的白酒丟糟為碳源的篩選培養基進行篩選富集，經分離純化后得到菌樣；將菌樣活化后，采用固體發酵培養基進行發酵培養，活化菌樣的接種量為固體發酵培養基的9-11％，然后將其浸提，抽濾，離心后得到菌酶液B，將菌酶液B與H菌酶液按1∶5-15的體積比混合后用于白酒丟糟的酶解，篩選得到L菌，經發酵制得L菌酶液，L菌酶液酶活為0.70-0.78IU/ml；

c.分別從窖泥、丟糟、酒廠周邊環境土壤中取樣，用以H菌酶液和L菌酶液共同酶解的白酒丟糟為碳源的篩選培養基進行篩選富集，經分離純化后得到菌樣，將菌樣活化后，采用固體發酵培養基進行發酵培養，活化菌樣的接種量為固體發酵培養基的9-11％，然后將其浸提，抽濾，離心后得到菌酶液C，將菌酶液C、H菌酶液和L菌酶液按1∶10-20∶1-10的體積比混合后用于白酒丟糟的酶解，篩選得到M菌，經發酵制得M菌酶液，M菌酶液酶活為0.45-0.49IU/ml；

d.將H菌酶液、L菌酶液和M菌酶液按照15-17∶2-4∶1的體積比混合均勻，得到混合菌酶液；

步驟a中，所述以白酒丟糟為碳源的篩選培養基配方為：白酒丟糟1-1.3％，(NH₄)₂SO₄0.3-0.5％，MgSO₄0.04-0.06％，KH₂PO₄0.1-0.15％，蛋白胨0.1-0.15％，NaCl 0.05-0.07％；

步驟b中，所述以H菌酶解后的白酒丟糟為碳源的篩選培養基配方為：經H菌酶液酶解后的白酒丟糟1-1.3％，(NH₄)₂SO₄0.3-0.5％，MgSO₄0.04-0.06％，KH₂PO₄0.08-0.12％，蛋白胨0.1-0.15％，NaCl 0.05-0.07％；

步驟c中，將H菌酶液和L菌酶液按3-5∶1的體積比混合后共同酶解白酒丟糟，所述以H菌酶液和L菌酶液共同酶解的白酒丟糟為碳源的篩選培養基配方為：經H菌酶液和L菌酶液共同酶解的白酒丟糟1-1.3％，(NH₄)₂SO₄0.3-0.5％，MgSO₄0.04-0.06％，KH₂PO₄0.1-0.15％，蛋白胨0.1-0.15％，NaCl 0.05-0.07％。