[發明專利]一種結合抗新冠病毒效應的金銀花和山銀花鑒別模型及其構建方法和應用

在審

• 申請號: 202110992781.7
• 申請日: 2021-08-27
• 公開（公告）號: CN113740474A
• 公開（公告）日: 2021-12-03
• 發明（設計）人: 王鐵杰;谷麗菲;王冰;殷果;王玨;喻謝安;王麗君;金一寶;謝雪晴
• 申請（專利權）人: 深圳市藥品檢驗研究院(深圳市醫療器械檢測中心)
• 主分類號: G01N30/86
• 分類號: G01N30/86
• 代理公司: 北京品源專利代理有限公司 11332
• 代理人: 潘登

1.一種結合抗新冠病毒效應的金銀花和山銀花鑒別模型的構建方法，其特征在于，所述構建方法包括以下步驟：

(1)建立金銀花、山銀花液相色譜指紋圖譜；

(2)對金銀花、山銀花抑制新冠病毒M^pro的活性進行測定，根據測定結果及步驟(1)中的指紋圖譜進行相關分析，篩選出具有抗新冠病毒效應的活性成分；

(3)利用步驟(1)中的指紋圖譜進行特征提取，篩選出能表征整體化學信息的特征性成分，整合步驟(2)得到的活性成分進行偏最小二乘-判別分析，構建模式識別模型。

2.根據權利要求1所述的結合抗新冠病毒效應的金銀花和山銀花鑒別模型的構建方法，其特征在于，步驟(1)所述建立金銀花、山銀花液相色譜指紋圖譜包括以下步驟：

(1’)將金銀花或山銀花分別用水浸泡、回流提取、濃縮、干燥，得到金銀花水提取物和山銀花水提取物；

(2’)將步驟(1’)得到的金銀花水提取物和山銀花水提取物分別溶解、過濾，取續濾液進樣進行超高效液相色譜檢測，根據結果建立所述液相色譜指紋圖譜；

優選地，步驟(1’)所述金銀花或山銀花與水的料液比為1:(20-30)g/mL；

優選地，步驟(1’)所述浸泡的時間為0.8-1.2h；

優選地，步驟(1’)所述回流提取的次數為2-4次。

3.根據權利要求2所述的結合抗新冠病毒效應的金銀花和山銀花鑒別模型的構建方法，其特征在于，步驟(2’)所述濾液的濃度為8-12mg/mL；

優選地，步驟(2’)所述超高效液相色譜檢測的柱溫為13-17℃，流速為0.7-1.1mL/min，進樣量為4-6μL；

優選地，步驟(2’)所述超高效液相色譜檢測的流動相包括流動相A和流動相B，所述流動相A包括質量分數0.08-0.12％的甲酸水溶液，所述流動相B包括乙腈；

優選地，步驟(2’)所述超高效液相色譜檢測的洗脫程序如下：

第0-5min時，流動相A與流動相B的體積比為(4-6):(94-96)；

第5-10min時，流動相A與流動相B的體積比由(4-6):(94-96)勻速變化至(9-11):(89-91)；

第10-15min時，流動相A與流動相B的體積比為(9-11):(89-91)；

第15-25min時，流動相A與流動相B的體積比由(9-11):(89-91)勻速變化至(19-21):(79-81)；

第25-40min時，流動相A與流動相B的體積比由(19-21):(79-81)勻速變化至(29-31):(69-71)；

優選地，步驟(2’)所述超高效液相色譜檢測的色譜柱為Agilent Poroshell SB-C18，規格為4.6mm×150mm×2.7μm。

4.根據權利要求1-3中任一項所述的結合抗新冠病毒效應的金銀花和山銀花鑒別模型的構建方法，其特征在于，步驟(2)所述對金銀花、山銀花抑制新冠病毒M^pro的活性進行測定具體包括以下步驟：分別測定金銀花和山銀花抑制新冠病毒M^pro的IC₅₀值，之后在兩者之間選擇任一濃度為測試濃度，以該測試濃度分別測定金銀花和山銀花對新冠病毒M^pro的抑制率。

5.根據權利要求4所述的結合抗新冠病毒效應的金銀花和山銀花鑒別模型的構建方法，其特征在于，步驟(2)所述篩選具體包括以下步驟：將步驟(1)建立的金銀花、山銀花液相色譜指紋圖譜與步驟(2)得到的金銀花和山銀花對新冠病毒M^pro的抑制率進行灰色關聯分析，得到具有抗新冠病毒效應的活性成分。

6.根據權利要求5所述的結合抗新冠病毒效應的金銀花和山銀花鑒別模型的構建方法，其特征在于，所述效應成分的關聯度不低于0.965。