[發明專利]一種化學修飾的木聚糖酶及其制備方法和應用在審
| 申請號： | 202110992324.8 | 申請日： | 2021-08-27 |
| 公開（公告）號： | CN113621596A | 公開（公告）日： | 2021-11-09 |
| 發明（設計）人： | 馬江鋒;姜岷;王寅竹;吳昊;董維亮 | 申請（專利權）人： | 南京工業大學 |
| 主分類號： | C12N9/42 | 分類號： | C12N9/42;C12N15/70;C12P19/14;C12P19/02;C12R1/19 |
| 代理公司： | 北京德崇智捷知識產權代理有限公司 11467 | 代理人： | 王斌 |
| 地址： | 211816 *** | 國省代碼： | 江蘇;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 化學 修飾 聚糖 及其 制備 方法 應用 | ||
1.一種化學修飾的木聚糖酶，其特征在于：所述木聚糖酶的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示，編碼基因如SEQ ID NO:2所示，化學修飾劑為右旋糖酐。
2.根據權利要求1所述的化學修飾的木聚糖酶，其特征在于：所述化學修飾劑為含有醛基的右旋糖酐。
3.根據權利要求1所述的化學修飾的木聚糖酶，其特征在于：化學修飾劑與木聚糖酶通過氨基酸的氨基進行偶聯。
4.根據權利要求2所述的化學修飾的木聚糖酶，其特征在于：所述含有醛基的右旋糖酐采用NaIO4氧化右旋糖酐的鄰羥基獲得。
5.根據權利要求2所述的化學修飾的木聚糖酶，其特征在于：所述含有醛基的右旋糖酐采用150kDa的右旋糖酐。
6.權利要求1所述的化學修飾的木聚糖酶的制備方法，其特征在于包括如下步驟：
（1）木聚糖酶的制備
將木聚糖酶編碼基因與表達載體pEt28a(+)相連接，并將連接產物轉化至大腸桿菌BL21(DE3) 細胞，獲得重組菌株；培養重組菌株進行發酵表達，發酵液破碎離心后，將上清液進行硫酸銨沉淀、離子交換柱純化，獲得木聚糖酶液；
（2）含醛基右旋糖酐的制備
避光下將2.4g NaIO4溶于10mL純水制得NaIO4溶液，將其倒入10mL濃度為2g/mL的右旋糖酐溶液中，室溫下避光攪拌8h，
反應完成后加入5mL的乙二醇反應2h后，反應液在8000-14000的透析袋中，過夜透析；
（3）木聚糖酶化學修飾物的制備
取1mL修飾劑與2mL木聚糖酶酶液，用pH 7.5的PBS溶液定容到10mL，加入0.1g木聚糖，35℃pH 7.0下反應6h后，加入0.1g氰基硼氫化鈉，繼續反應1h后，4℃下透析4h，得到木聚糖酶化學修飾物。
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