[發明專利]一種高效3D培養脂肪干細胞的方法

在審

• 申請號: 202110987829.5
• 申請日: 2021-08-26
• 公開（公告）號: CN113462644A
• 公開（公告）日: 2021-10-01
• 發明（設計）人: 金浩范;尹起亮
• 申請（專利權）人: 吉林大學第一醫院
• 主分類號: C12N5/0775
• 分類號: C12N5/0775
• 代理公司: 深圳市洪荒之力專利代理有限公司 44541
• 代理人: 王春穎

本發明涉及脂肪干細胞培養技術領域，具體是一種高效3D培養脂肪干細胞的方法，包括以下步驟：（1）脂肪干細胞的獲得；（2）細胞計數后，將脂肪干細胞重懸于水凝膠中，進行3D懸浮培養；（3）細胞生長到80?90%密度后進行1：2傳代繼續于水凝膠中培養，本發明高效3D培養脂肪干細胞的方法，能維持細胞形態，延緩干細胞衰老和多向分化，維持干性和細胞生物學活性，為干細胞體外實驗研究提供了一種可靠的培養方式，并為體內實驗在體外的高度模擬提供了可能。

技術領域

本發明涉及脂肪干細胞培養技術領域，具體是一種高效3D培養脂肪干細胞的方法。

背景技術

干細胞是一種具有自我更新能力以及多向分化潛能的細胞，可以修復受損的細胞和組織被應用于多種疾病治療。其中，間充質干細胞因其相對于其他類型細胞的優勢而備受關注，這些優勢包括不存在倫理和法律問題、免疫原性低、可用性充足等。脂肪干細胞是來源于脂肪組織的一種MSCs，具有自我更新和多向分化的潛力，并具有分泌數百種細胞因子的能力。由于其來源豐富，ADSCs被認為是最有前景的成體干細胞類型的臨床應用，并被廣泛應用于組織工程和再生醫學研究，由于其豐富性和易獲得性，已成為利用率最高的成體干細胞之一。最近的研究表明，旁分泌細胞因子、外泌體和其他活性物質是ADSCs發揮生物學效應的主要因素。

現有的培養脂肪干細胞的方法，大部分還是采用2D培養，2D培養僅在一個平面上支持干細胞生長，無法再現生物體內細胞真實的3D立體微環境，2D培養環境在生物活性、培養基結構、營養物質的釋放等很多方面均遠不及3D培養，使干細胞逐漸喪失其原有的性狀、形態、結構和功能，導致其研究結果與體內試驗結果經常不一致，精確性較低，所提供的培養環境與生物體內微環境差距甚大，必然對干細胞的增殖分化產生負面作用。同時，2D培養增殖效率低，已經無法滿足臨床干細胞大劑量應用的需求，因此，針對以上現狀，迫切需要開發一種高效3D培養脂肪干細胞的方法，以克服當前實際應用中的不足。

發明內容

本發明的目的在于提供一種高效3D培養脂肪干細胞的方法，以解決上述背景技術中提出的問題。

為實現上述目的，本發明提供如下技術方案：

一種高效3D培養脂肪干細胞的方法，包括以下步驟：

（1）脂肪干細胞的獲得；

（2）細胞計數后，將脂肪干細胞重懸于水凝膠中，進行3D懸浮培養；

（3）細胞生長到80-90%密度后進行1：2傳代繼續于水凝膠中培養。

與現有技術相比，本發明的有益效果是：

在培養脂肪干細胞的工作中，將獲得的脂肪干細胞重懸于水凝膠中，通過該3D培養水凝膠通過與脂肪干細胞充分混合，使細胞完全懸浮于水凝膠中，進而模擬體內細胞生長微環境，可有效的延緩干細胞衰老，抑制分化和維持干細胞活性，是一種有效模擬體內生理狀態，為細胞提供適宜微環境的細胞培養方案，且通過實驗證明，本發明高效3D培養脂肪干細胞的方法對體外大量培養高質量的脂肪干細胞具有顯著效果，具有廣闊的應用前景，值得推廣。

附圖說明

圖1為本發明分離的脂肪干細胞的鑒定圖，是對脂肪干細胞的標志分子CD34，CD45和CD44，CD105的免疫熒光結果圖。

圖2為本發明脂肪干細胞3D培養對比普通2D培養不同時間細胞形態的變化。

圖3為本發明3D培養對比普通2D培養的脂肪干細胞衰老的評價。

圖4為本發明3D培養對比普通2D培養的脂肪干細胞體外增殖和分化的評價。

圖5為本發明3D培養對比普通2D培養的脂肪干細胞體外糖酵解和線粒體呼吸水平的評價。

具體實施方式