[發明專利]一種高效3D培養脂肪干細胞的方法

在審

• 申請號: 202110987829.5
• 申請日: 2021-08-26
• 公開（公告）號: CN113462644A
• 公開（公告）日: 2021-10-01
• 發明（設計）人: 金浩范;尹起亮
• 申請（專利權）人: 吉林大學第一醫院
• 主分類號: C12N5/0775
• 分類號: C12N5/0775
• 代理公司: 深圳市洪荒之力專利代理有限公司 44541
• 代理人: 王春穎

1.一種高效3D培養脂肪干細胞的方法，其特征在于，包括以下步驟：

（1）脂肪干細胞的獲得；

（2）細胞計數后，將脂肪干細胞重懸于水凝膠中，進行3D懸浮培養；

（1）細胞生長到80-90%密度后進行1：2傳代繼續于水凝膠中培養。

2.根據權利要求1所述的高效3D培養脂肪干細胞的方法，其特征在于，在步驟（1）中，所述脂肪干細胞為來源于小鼠的腹股溝脂肪組織，并通過組織塊培養法獲得脂肪干細胞。

3.根據權利要求2所述的高效3D培養脂肪干細胞的方法，其特征在于，在步驟（2）中，所述水凝膠為無動物源性多糖水凝膠體系，用于懸浮細胞和貼壁細胞的培養。

4.根據權利要求3所述的高效3D培養脂肪干細胞的方法，其特征在于，在步驟（2）和（3）中，所述脂肪干細胞重懸培養于3D培養水凝膠中，保證細胞的生長空間，模擬體內細胞生長微環境。

5.根據權利要求1-4任一項所述的高效3D培養脂肪干細胞的方法，其特征在于，3D培養對脂肪干細胞形態學特征的影響包括：將脂肪干細胞置于普通的2D和3D培養中，在培養3天、7天、14天和21天時分別觀察細胞的形態，并照相。

6.根據權利要求5所述的高效3D培養脂肪干細胞的方法，其特征在于，3D培養對脂肪干細胞衰老的影響包括：將脂肪干細胞置于普通的2D和3D培養中，在培養3天、7天、14天和21天時分別進行β-半乳糖苷酶染色觀察細胞衰老情況。

7.根據權利要求6所述的高效3D培養脂肪干細胞的方法，其特征在于，3D培養對脂肪干細胞增殖和分化的影響包括：將脂肪干細胞置于普通的2D和3D培養中，在培養3天、7天、14天和21天時分別進行流式細胞術和活細胞染色觀察細胞增殖情況，同時進行成脂和成骨分化染色。

8.根據權利要求7所述的高效3D培養脂肪干細胞的方法，其特征在于，3D培養脂肪干細胞能量代謝的影響包括：將脂肪干細胞置于普通的2D和3D培養中，在培養3天、7天、14天和21天時分別進行糖酵解和線粒體呼吸水平的測定，以評價脂肪干細胞的能量代謝。