[發明專利]pAPN基因第16外顯子的基因編輯系統及其應用在審
| 申請號： | 202110985538.2 | 申請日： | 2021-08-26 |
| 公開（公告）號： | CN113604502A | 公開（公告）日： | 2021-11-05 |
| 發明（設計）人： | 李奎;牟玉蓮;徐長江;徐奎 | 申請（專利權）人： | 中國農業科學院北京畜牧獸醫研究所 |
| 主分類號： | C12N15/85 | 分類號： | C12N15/85;C12N15/113;C12N15/55;C12N5/10;C12N15/877;A01K67/027 |
| 代理公司： | 北京超凡宏宇專利代理事務所(特殊普通合伙) 11463 | 代理人： | 徐樂 |
| 地址： | 100193 *** | 國省代碼： | 北京;11 |
| 權利要求書： | 查看更多 | 說明書： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | papn 基因 16 外顯子 編輯 系統 及其 應用 | ||
1.一種pAPN基因第16外顯子的基因編輯系統，其特征在于，包括核酸內切酶和sgRNA對；
所述sgRNA對包括pAPN-sgRNA-1和pAPN-sgRNA-2；
編碼pAPN-sgRNA-1的核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示；
編碼pAPN-sgRNA-2的核苷酸序列如SEQ ID NO：2所示。
2.根據權利要求1所述的基因編輯系統，其特征在于，所述核酸內切酶和sgRNA對的編輯載體包括編輯載體1和編輯載體2；
編輯載體1表達核酸內切酶和pAPN-sgRNA-1；
編輯載體2表達核酸內切酶和pAPN-sgRNA-2。
3.根據權利要求2所述的基因編輯系統，其特征在于，編輯載體1和編輯載體2的載體骨架獨立地包括CRISPR質粒；
優選地，所述CRISPR質粒包括CRISPR/Cas9、CRISPR/Cas9n、CRISPR/Cpf1或CRISPR/C2c2，優選為CRISPR/Cas9；
優選地，所述CRISPR/Cas9質粒包括pX330、pX260、pX334、pX335、pX458、pX459、pX461、pX462、pX551或pX552，優選為pX458。
4.權利要求1-3任一項所述的基因編輯系統在修飾pAPN基因第16外顯子或制備修飾pAPN基因第16外顯子的產品中的應用。
5.一種豬pAPN基因第16外顯子修飾的試劑盒，其特征在于，包括權利要求1-3任一項所述的基因編輯系統。
6.一種pAPN基因第16外顯子修飾的細胞的制備方法，其特征在于，將權利要求1-3任一項所述的基因編輯系統轉入目標細胞中，得到pAPN基因第16外顯子修飾的細胞。
7.根據權利要求6所述的細胞的制備方法，其特征在于，所述細胞包括豬成纖維細胞，優選為豬胎兒成纖維細胞；
優選地，轉入方法包括電穿孔法或脂質體轉染法；
優選地，在基因編輯系統轉入細胞后，還包括篩選和鑒定的步驟；
優選地，所述篩選為流式分選；
優選地，所述鑒定包括測序鑒定。
8.通過權利要求6或7所述的制備方法制備得到的細胞。
9.一種用于豬pAPN基因第16外顯子修飾的方法，其特征在于，將權利要求8所述的細胞移植入去核的卵母細胞，得到重組克隆胚胎，將所述重組克隆胚胎移植入母體內經妊娠，獲得pAPN基因第16外顯子修飾的基因編輯豬；
或者通過顯微注射的方法，將含有權利要求1-3任一項所述的基因編輯系統微注射到豬合子期胚胎中，得到pAPN基因修飾胚胎，將所述基因編輯胚胎移植入母體內經妊娠，獲得pAPN基因第16外顯子定點修飾的基因編輯豬。
10.根據權利要求9所述的方法，其特征在于，基因編輯豬出生后還包括鑒定的步驟；
優選地，所述鑒定包括測序鑒定。
該專利技術資料僅供研究查看技術是否侵權等信息，商用須獲得專利權人授權。該專利全部權利屬于中國農業科學院北京畜牧獸醫研究所，未經中國農業科學院北京畜牧獸醫研究所許可，擅自商用是侵權行為。如果您想購買此專利、獲得商業授權和技術合作，請聯系【客服】
本文鏈接：http://www.szxzyx.cn/pat/books/202110985538.2/1.html，轉載請聲明來源鉆瓜專利網。
