[發明專利]自體CD34+細胞的提取方法、修復營養液和提取方法的應用

在審

• 申請號: 202110985071.1
• 申請日: 2021-08-25
• 公開（公告）號: CN113667641A
• 公開（公告）日: 2021-11-19
• 發明（設計）人: 劉建勝;程楠;曹艷
• 申請（專利權）人: 杭州美約健康管理有限公司
• 主分類號: C12N5/0789
• 分類號: C12N5/0789;A61K8/99;A61K8/44;A61K8/64;A61K8/65;A61K8/67;A61K8/73;A61K8/98;A61Q19/08;A61Q19/00
• 代理公司: 北京知果之信知識產權代理有限公司 11541
• 代理人: 卜榮麗;李志剛

本申請提供了一種自體CD34+細胞的提取方法、修復營養液和提取方法的應用，其方法包括：利用淋巴細胞分離液從外周血分離單個核細胞；將得到的單個核細胞懸浮于混合緩沖液中，制成細胞懸浮液，其中，所述混合緩沖液由磷酸鹽緩沖鹽溶液和牛血清蛋白配制的；利用磁珠分選MACS技術，洗脫所述細胞懸浮液中的CD34?細胞；利用所述混合緩沖液沖洗洗脫CD34?細胞后得到的細胞懸浮液，得到自體CD34+細胞。本申請操作方法簡單，提取成本低，將自體CD34+細胞用于皮膚修復營養液，可得到修復功能強修復營養液，顯著延緩衰老，改善皮膚效果好的營養液，極大程度上提高了皮膚的自我修復能力。

技術領域

本申請涉及美容領域，具體地，涉及一種自體CD34+細胞的提取方法、修復營養液和提取方法的應用。

背景技術

隨著人們生活水平的提高，人們對美容的期望越來越強烈，逐漸追求卓越的效果。

人類走向衰老，主要體現在外表的變化上，皮膚出現皺紋，脫垂，塌陷等直接影響的人們的面容，傳統的護膚技術，是在皮膚表面涂抹護膚品，以達到保持皮膚良好狀態的目的。

但是隨著醫療美容技術的發展，人們已經不再滿足于傳統技術，向皮膚注射美容針成為醫療美容技術中護膚的主要手段。

普通注射液只能保持皮膚的水潤，而不具有修復能力，人體的皮膚受損后，缺損周圍上皮斷端的基底層細胞向創面移動，上皮細胞分裂活躍，逐漸覆蓋傷口表面，上皮進一步分化，重建失去的組織結構和功能，如皮膚可以出現上皮的角化等。

因此，亟待一種對人體無害，且修復能力強的注射液，以滿足上述需求。

發明內容

本申請的主要目的在于提一種自體CD34+細胞的提取方法、修復營養液和提取方法的應用，通過采用磁珠分離的方法，可獲得人體自身高濃度的CD34+細胞，利用該自體CD34+細胞配制的修復營養液修復功能強，能夠實現皮膚的自我修復，達到延緩衰老，改善皮膚的作用。

第一方面，提供了一種自體CD34+細胞的提取方法，所述方法包括：

利用淋巴細胞分離液從外周血分離單個核細胞；

將得到的單個核細胞懸浮于混合緩沖液中，制成細胞懸浮液，其中，所述混合緩沖液由磷酸鹽緩沖鹽溶液和牛血清蛋白配制的；

利用磁珠分選MACS技術，洗脫所述細胞懸浮液中的CD34-細胞；

利用所述混合緩沖液沖洗洗脫CD34-細胞后得到的細胞懸浮液，得到自體CD34+細胞。

可選的，上述方法的具體步驟為：

利用淋巴細胞分離液從外周血分離單個核細胞；

將54～108個單個細胞核懸浮于150～300uL的混合緩沖液中，并利用MACS磁性分離試劑盒制備成250～500uL的細胞懸浮液；其中所述混合緩沖液包含1～10wt％的牛血清蛋白和5～25mmol/L的磷酸鹽緩沖鹽溶液；

將分離柱固定于MACS磁場中，使所述細胞懸浮液緩慢通過分離柱，以洗脫所述細胞懸浮液中的CD34-細胞；

將分離柱移出所述MACS磁場，利用所述混合緩沖液沖洗洗脫CD34-細胞后得到的細胞懸浮液，得到自體CD34+細胞。

第二方面，提供了一種修復營養液，所述修復營養液含采用上述任一的自體CD34+細胞的提取方法提取的自體CD34+細胞。

可選的，所述修復營養液包括下述組分：

自體CD34+細胞 10～50份；

自體膠原蛋白 10～20重量份；

成纖維細胞生長因子溶液 50～100重量份；