[發(fā)明專(zhuān)利]自體CD34+細(xì)胞的提取方法、修復(fù)營(yíng)養(yǎng)液和提取方法的應(yīng)用

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202110985071.1
• 申請(qǐng)日: 2021-08-25
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN113667641A
• 公開(kāi)（公告）日: 2021-11-19
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 劉建勝;程楠;曹艷
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 杭州美約健康管理有限公司
• 主分類(lèi)號(hào): C12N5/0789
• 分類(lèi)號(hào): C12N5/0789;A61K8/99;A61K8/44;A61K8/64;A61K8/65;A61K8/67;A61K8/73;A61K8/98;A61Q19/08;A61Q19/00
• 代理公司: 北京知果之信知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11541
• 代理人: 卜榮麗;李志剛

1.一種自體CD34+細(xì)胞的提取方法，其特征在于，所述方法包括：

利用淋巴細(xì)胞分離液從外周血分離單個(gè)核細(xì)胞；

將得到的單個(gè)核細(xì)胞懸浮于混合緩沖液中，制成細(xì)胞懸浮液，其中，所述混合緩沖液由磷酸鹽緩沖鹽溶液和牛血清蛋白配制的；

利用磁珠分選MACS技術(shù)，洗脫所述細(xì)胞懸浮液中的CD34-細(xì)胞；

利用所述混合緩沖液沖洗洗脫CD34-細(xì)胞后得到的細(xì)胞懸浮液，得到自體CD34+細(xì)胞。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述方法的具體步驟為：

利用淋巴細(xì)胞分離液從外周血分離單個(gè)核細(xì)胞；

將108個(gè)單個(gè)細(xì)胞核懸浮于300uL的混合緩沖液中，并利用MACS磁性分離試劑盒制備成500uL的細(xì)胞懸浮液；其中所述混合緩沖液包含1wt％的牛血清蛋白和5mmol/L的磷酸鹽緩沖鹽溶液；

將分離柱固定于MACS磁場(chǎng)中，使所述細(xì)胞懸浮液緩慢通過(guò)分離柱，以洗脫所述細(xì)胞懸浮液中的CD34-細(xì)胞；

將分離柱移出所述MACS磁場(chǎng)，利用所述混合緩沖液沖洗洗脫CD34-細(xì)胞后得到的細(xì)胞懸浮液，得到自體CD34+細(xì)胞。

3.一種修復(fù)營(yíng)養(yǎng)液，其特征在于，所述修復(fù)營(yíng)養(yǎng)液含采用權(quán)利要求1或2所述的自體CD34+細(xì)胞的提取方法提取的自體CD34+細(xì)胞。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的修復(fù)營(yíng)養(yǎng)液，其特征在于，所述修復(fù)營(yíng)養(yǎng)液包括下述組分：

自體CD34+細(xì)胞10～50份；

自體膠原蛋白10～20重量份；

成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子溶液50～100重量份；

表皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子溶液15～25重量份；

左旋維生素C 5～20重量份；

氨基酸1～5重量份；

透明質(zhì)酸5～10重量份；

生理鹽水25～150重量份。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的修復(fù)營(yíng)養(yǎng)液，其特征在于，所述修復(fù)營(yíng)養(yǎng)液還包括下述組分：

自體脂肪干細(xì)胞10-30份。

6.根據(jù)權(quán)利要求4所述的修復(fù)營(yíng)養(yǎng)液，其特征在于，所述修復(fù)營(yíng)養(yǎng)液還包括下述組分：

羊胎素提取液10～20重量份；

煙酰胺10～20重量份。

7.根據(jù)權(quán)利要求4所述的修復(fù)營(yíng)養(yǎng)液，其特征在于，所述修復(fù)營(yíng)養(yǎng)液還包括下述組分：

肉毒素1～5重量份；

還原型谷胱甘肽1～5重量份。

8.根據(jù)權(quán)利要求4所述的修復(fù)營(yíng)養(yǎng)液，其特征在于，所述修復(fù)營(yíng)養(yǎng)液包括下述組分：

自體CD34+細(xì)胞10～20份；

自體膠原蛋白10～15重量份；

成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子溶液75～100重量份；

表皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子溶液20～25重量份；

左旋維生素C10～20重量份；

氨基酸1～5重量份；

透明質(zhì)酸5～10重量份；

生理鹽水50～100重量份。

9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的修復(fù)營(yíng)養(yǎng)液，其特征在于，所述修復(fù)營(yíng)養(yǎng)液包括下述組分：

自體CD34+細(xì)胞15～20份；

自體膠原蛋白15重量份；

成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子溶液90重量份；

表皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子溶液25重量份；

左旋維生素C10重量份；

氨基酸5重量份；

透明質(zhì)酸10重量份；

生理鹽水75重量份。

10.一種如權(quán)利要求1或2所述的自體CD34+細(xì)胞的提取方法的應(yīng)用，其特征在于，采用權(quán)利要求1或2所述的自體CD34+細(xì)胞的提取方法提取的自體CD34+細(xì)胞用于人體皮膚的修復(fù)。