[發明專利]適配體納米比色生物傳感器及其應用和產品、大腸桿菌的檢測方法

在審

• 申請號: 202110984452.8
• 申請日: 2021-08-25
• 公開（公告）號: CN113702308A
• 公開（公告）日: 2021-11-26
• 發明（設計）人: 周祺惠;劉璐彬;韓澤禹
• 申請（專利權）人: 青島大學
• 主分類號: G01N21/31
• 分類號: G01N21/31;G01N21/78;B82Y15/00;B82Y40/00
• 代理公司: 北京酷愛智慧知識產權代理有限公司 11514
• 代理人: 鐘繼蓮

本發明提供了一種適配體納米比色生物傳感器及其應用和產品、大腸桿菌的檢測方法，涉及生物檢測技術領域。本發明提供的適配體納米比色生物傳感器，包括納米材料和吸附在納米材料上的適配體，其中納米材料具有類過氧化物酶活性，適配體為具有特定核苷酸序列的核酸，能夠特異性識別并結合大腸桿菌。本發明的適配體納米比色生物傳感器特異性好，靈敏度高，能夠應用于大腸桿菌的檢測以及制備診斷膿毒癥的產品中。本發明提供的大腸桿菌的檢測方法，簡單方便，能夠快速準確的實現對大腸桿菌的定性定量檢測，減少大腸桿菌的檢測時間，降低檢測成本。

技術領域

本發明涉及生物檢測技術領域，尤其是涉及一種適配體納米比色生物傳感器及其應用和產品、大腸桿菌的檢測方法。

背景技術

膿毒癥是機體對感染產生的炎癥反應失調而引起生理學和器官功能損害的臨床綜合征，也是危重病患者的首要死因。膿毒癥多由細菌感染引起，而腹腔細菌感染尤為常見。在重癥加強護理病房(ICU)，腹腔感染導致的膿毒癥患者占63％，其中大腸桿菌(E.coli)為主的革蘭氏陰性細菌導致的腹膜炎性膿毒癥占25-71％。

目前傳統的大腸桿菌檢測方法過程須經過預增菌、選擇性增菌、分離培養、生理生化鑒定及血清型鑒定等步驟，整個過程繁瑣耗時(3-7天)。而且在膿毒癥的樣品中微生物種類相對復雜，致病菌數量可能相對較少，即使經過選擇性增菌培養也可能發生漏檢現象。上述傳統病原菌的分離鑒定較為費時耗力，檢測靈敏度差，較低的檢測效率將嚴重地耽誤病情并錯過最佳治療期限，雖然如此但其仍是臨床醫學細菌鑒定的主要途徑。一些新型檢測方法，如：ELISA法、PCR方法以及生物傳感器法對大腸桿菌的檢測靈敏度高，然而它們仍需要較長的檢測時間、昂貴的儀器以及專業的技術人員，所以只在少數大醫院使用。因此，建立靈敏、快速且簡便的檢測方法對于膿毒癥中大腸桿菌的防控顯得尤為重要。

適配體納米比色傳感器近年來吸引了研究人員的廣泛關注，該技術不僅發揮了比色法簡便快速靈敏的優點，還充分利用了適配體針對目標物極高的親和性和特異性。適配體是一種短的單鏈核酸序列，能夠以類似抗體的方式結合目標分子。到目前為止，已經產生了數以千計的可用于多種靶點的適配體，靶點可以是小金屬離子、有機分子、多肽、蛋白質、病毒、細菌、整個細胞，甚至活體動物體內的靶標。與傳統的細菌檢測方法相比，基于適配體的檢測方法具有更高的靈敏性、特異性及快速性。然而，適配體納米比色傳感器還未用于膿毒癥中細菌的檢測研究中。

有鑒于此，特提出本發明。

發明內容

本發明的第一目的在于提供一種適配體納米比色生物傳感器。

本發明的第二目的在于提供一種適配體納米比色生物傳感器在制備診斷膿毒癥的產品中的應用。

本發明的第三目的在于提供一種診斷膿毒癥的產品。

本發明的第四目的在于提供大腸桿菌的檢測方法，以解決上述問題的至少一種。

第一方面，本申請提供了一種適配體納米比色生物傳感器，包括適配體和納米材料；

所述適配體吸附在納米材料上；

所述適配體包括具有如SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.2、SEQ ID NO.3、SEQ ID NO.4或SEQ ID NO.5所示核苷酸序列的核酸中的至少一種；

所述納米材料具有類過氧化物酶活性，適配體吸附在納米材料上時，類過氧化物酶活性增強。

作為進一步技術方案，所述納米材料包括蛋白金納米簇、磁性納米粒子或石墨烯納米粒子。

作為進一步技術方案，所述蛋白金納米簇的制備方法包括如下步驟：

將牛血清白蛋白與氯金酸混合，調節溶液pH至堿性，加熱后制備得到蛋白金納米簇。

作為進一步技術方案，所述加熱包括水浴加熱；