[發明專利]適配體納米比色生物傳感器及其應用和產品、大腸桿菌的檢測方法

在審

• 申請號: 202110984452.8
• 申請日: 2021-08-25
• 公開（公告）號: CN113702308A
• 公開（公告）日: 2021-11-26
• 發明（設計）人: 周祺惠;劉璐彬;韓澤禹
• 申請（專利權）人: 青島大學
• 主分類號: G01N21/31
• 分類號: G01N21/31;G01N21/78;B82Y15/00;B82Y40/00
• 代理公司: 北京酷愛智慧知識產權代理有限公司 11514
• 代理人: 鐘繼蓮

1.一種適配體納米比色生物傳感器，其特征在于，包括適配體和納米材料；

所述適配體吸附在納米材料上；

所述適配體包括具有如SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.2、SEQ ID NO.3、SEQ ID NO.4或SEQID NO.5所示核苷酸序列的核酸中的至少一種；

所述納米材料具有類過氧化物酶活性，適配體吸附在納米材料上時，類過氧化物酶活性增強。

2.根據權利要求1所述的適配體納米比色生物傳感器，其特征在于，所述納米材料包括蛋白金納米簇、磁性納米粒子或石墨烯納米粒子。

3.根據權利要求2所述的適配體納米比色生物傳感器，其特征在于，所述蛋白金納米簇的制備方法包括如下步驟：

將牛血清白蛋白與氯金酸混合，調節溶液pH至堿性，加熱后制備得到蛋白金納米簇。

4.根據權利要求3所述的適配體納米比色生物傳感器，其特征在于，所述加熱包括水浴加熱；

優選地，所述加熱的溫度為95～100℃，優選為100℃；

優選地，所述加熱的時間為2～4min，優選為3min。

5.權利要求1-4任一項所述的適配體納米比色生物傳感器在制備診斷膿毒癥的產品中的應用。

6.一種診斷膿毒癥的產品，其特征在于，包括權利要求1-4任一項所述的適配體納米比色生物傳感器。

7.一種大腸桿菌的檢測方法，其特征在于，包括如下步驟：

a.將適配體和蛋白金納米簇混合，進行第一次孵育，然后加入已知濃度的大腸桿菌，進行第二次孵育，再加入過氧化氫和3,3',5,5'-四甲基聯苯胺，進行第三次孵育，之后在652nm波長下檢測吸光度，得到大腸桿菌濃度與吸光度的關系；

b.將適配體和蛋白金納米簇混合，進行第一次孵育，然后加入待測樣品，進行第二次孵育，再加入過氧化氫和3,3',5,5'-四甲基聯苯胺，進行第三次孵育，之后在652nm波長下檢測吸光度，根據a步驟中得到的腸桿菌濃度與吸光度的關系計算待測樣品中大腸桿菌的濃度；

所述適配體包括具有如SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.2、SEQ ID NO.3、SEQ ID NO.4或SEQID NO.5所示核苷酸序列的核酸中的至少一種。

8.根據權利要求7所述的大腸桿菌的檢測方法，其特征在于，所述第一次孵育的溶液中適配體的濃度為1.4～1.6μM，優選為1.5μM；

優選地，所述第一次孵育的溶液中蛋白金納米簇的濃度為0.005～0.015mg/mL，優選為0.010mg/mL；

優選地，所述第一次孵育的時間為20～40min，優選為30min。

9.根據權利要求7所述的大腸桿菌的檢測方法，其特征在于，所述已知濃度的大腸桿菌或待測樣品的加入量與第一次孵育的溶液的體積比為1:1～1:20，優選為1:9；

優選地，所述第二次孵育的時間0.5～2h，優選為1h。

10.根據權利要求7所述的大腸桿菌的檢測方法，其特征在于，所述第三次孵育的溶液中過氧化氫的濃度為300～500mM,優選為400mM；

優選地，所述第三次孵育的溶液中3,3',5,5'-四甲基聯苯胺的濃度為500-600μM，優選為500μM；

優選地，所述第三次孵育的溶液的pH為3～4，優選為4；

優選地，所述第三次孵育的溫度為20～40℃，優選為30℃；

優選地，所述第三次孵育的時間為40～50min，優選為40min；

優選地，所述第三次孵育的溶液與所述第二次孵育的溶液的體積比為1:2～2:1，優選為1:1。