[發明專利]一種同時鑒定辣椒雄性不育三系雜交種恢復性和真實性的分子標記及其鑒定方法

有效

• 申請號: 202110982915.7
• 申請日: 2021-08-25
• 公開（公告）號: CN113637791B
• 公開（公告）日: 2023-05-30
• 發明（設計）人: 林多;劉瀟蔚;楊延杰;王輝;朱文瑩;代佳汐
• 申請（專利權）人: 青島農業大學
• 主分類號: C12Q1/6895
• 分類號: C12Q1/6895;C12Q1/6858;C12N15/11
• 代理公司: 青島合創知識產權代理事務所(普通合伙) 37264
• 代理人: 王曉曉

本發明公開了一種同時鑒定辣椒雄性不育三系雜交種恢復性和真實性的分子標記及其鑒定方法。本發明利用辣椒基因組序列中的SSR位點設計得到了兩個能夠同時鑒定辣椒雄性不育三系雜交種恢復性和真實性的分子標記CR?S?01和CR?S?02，進而建立了一種簡單、快速、準確且同時鑒定色素加工型辣椒雄性不育三系雜交種的真實性、純度及恢復性的方法，能夠為加快色素加工型辣椒雄性不育三系雜交種的良種檢驗和父本恢復系的選育提供依據。本發明利用上述兩個分子標記明確區分開雜交后代中的真、假雜交種，并同時鑒定出雜交后代中是否含有雄性不育恢復基因，可極大降低鑒定雜交種的真實性、純度及恢復性及的操作難度和鑒定成本。

技術領域

本發明屬于育種技術領域，具體涉及一種同時鑒定辣椒雄性不育三系雜交種恢復性和真實性的分子標記及其鑒定方法。

背景技術

辣椒，茄科辣椒屬，是一種重要的蔬菜作物和調味料，因其適應性強，風味獨特，營養價值豐富，產業價值高，而在全國范圍內廣泛種植，是我國傳統的出口產品之一。我國種植的辣椒種類可分為鮮食椒和加工型辣椒，相較于鮮食椒，加工型辣椒的經濟效益高，產業鏈長，產品增值潛力大，如主要來源自色素加工型辣椒的辣椒紅素，被廣泛應用于食品乃至飼料、化妝品、和藥品的加工中。雖然加工型辣椒的產業發展前景廣闊，用種量大，但發展水平與鮮食辣椒產業相比較低，且現階段關于加工型辣椒專用雜交種選育的研究較少，栽培上仍以地方品種為主，該現狀亟需得到改善。

大部分辣椒雜交種在長勢、產量、品質和抗逆性等方面均表現出十分顯著的雜種優勢特性，近年來，雜交品種已廣泛應用于辣椒的商業化生產中。利用雄性不育三系配套雜交制種成本低，是比較理想的辣椒制種手段。該育種體系由不育系、保持系和恢復系組成，穩定的雄性不育系的存在極大減少了母本去雄和授粉的人力成本消耗，且其與強育性恢復系雜交后新產生的F1代雜交種不僅育性可以恢復正常，還能進行自交結實，具有適應性廣、制種容易、制種產量高、成本低等優點。但由于機械混雜和人為等原因導致的生產過程中無法避免的種子混雜的問題，“假雜種”是雜交制種生產中極受關注的問題。

種子作為農業生產的基礎資料，三系雜交制種后關于雜交種子的真實性、純度及育性恢復的鑒定至關重要。目前的常規鑒定方法有田間鑒定、生化鑒定和分子鑒定。田間鑒定的準確性雖高，但所需鑒定周期長，人力成本高；而生化水平上的鑒定則易因蛋白質的多態性低導致不能完全顯示出品種間的差異；相比之下，使用分子標記鑒定可直接鑒定出其品種基因水平上的差異，且鑒定周期短，是未來進行品種鑒定的主要發展趨勢。

雖然目前已公開的辣椒分子標記較多，但分子標記在實際的應用中表現的結果并不理想。例如有些分子標記雖與恢復基因Rf圖位緊密，但在實際應用中所表現出的鑒定結果與表型吻合度存在偏差，甚至可能產生無擴增出目的條帶的現象。還有些分子標記只針對辣椒品種的真實性或育性的單一屬性開發，分子標記的單一鑒定結果不能全面評價種子的可用程度。還有是根據辣椒全基因組開發的分子標記，提供的標記數量大，沒有品種針對性，在實際操作中需要多個標記配合使用，鑒定工作量大。還有些分子標記僅為顯性標記，無法確切區分純合基因型還是和雜合基因型，應用時容易受到外界溫度等環境的干擾。

目前SSR（Simple?Sequence?Repeats，簡單重復序列）由于其位點大量廣泛地分布于辣椒的整個基因組，具有多等位基因的特性，可揭示的多態性高，在目前的標記開發中較受青睞。

因此，隨著育種研究的快速發展，為了縮短辣椒雄性不育雜交種的鑒定周期、降低鑒定難度，目前急需針對不同品種辣椒開發具有特異性的且能夠同時鑒定雜交種的真實性、純度及恢復性的共顯性分子標記。

發明內容

為了克服和解決現有技術中存在不足和缺陷，本發明的目的在于提供一種同時鑒定辣椒雄性不育三系雜交種恢復性和真實性的分子標記及其鑒定方法。

為實現本發明的目的，本發明通過以下技術方案予以實現：