[發明專利]一種同時鑒定辣椒雄性不育三系雜交種恢復性和真實性的分子標記及其鑒定方法有效
| 申請號： | 202110982915.7 | 申請日： | 2021-08-25 |
| 公開（公告）號： | CN113637791B | 公開（公告）日： | 2023-05-30 |
| 發明（設計）人： | 林多;劉瀟蔚;楊延杰;王輝;朱文瑩;代佳汐 | 申請（專利權）人： | 青島農業大學 |
| 主分類號： | C12Q1/6895 | 分類號： | C12Q1/6895;C12Q1/6858;C12N15/11 |
| 代理公司： | 青島合創知識產權代理事務所(普通合伙) 37264 | 代理人： | 王曉曉 |
| 地址： | 266000 山*** | 國省代碼： | 山東;37 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 同時 鑒定 辣椒 雄性不育 雜交種 恢復 真實性 分子 標記 及其 方法 | ||
1.利用分子標記CR-S-01或者分子標記CR-S-02同時進行辣椒雄性不育三系雜交種恢復性和真實性的鑒定方法，其特征在于，所述鑒定方法包括以下步驟：
（1）提取辣椒雄性不育三系雜交種及其父本、母本的基因組DNA；
（2）以步驟（1）中的基因組DNA為模板，利用分子標記CR-S-01或者分子標記CR-S-02進行PCR擴增，PCR產物進行凝膠電泳檢測；
（3）將辣椒雄性不育三系雜交種及其父本、母本的擴增條帶進行比對，若在辣椒雄性不育三系雜交種中出現共顯性標記，則判斷其為親本的真實雜交種且含雄性不育恢復基因；
所述分子標記CR-S-01的序列為：
CR-S-01?F：CTCCCTTATGTGCTAACTTTTGG；
CR-S-01?R：ATCTTCTTCATCAGCTTCCTCCT；
所述分子標記CR-S-02的序列為：
CR-S-02?F：CTCCCTTATGTGCTAACTTTTGG；
CR-S-02?R：ATTCATCTTCTTCATCAGCTTCC；
所述共顯性標記為辣椒雄性不育三系雜交種中同時顯示出母本與父本的互補條帶。
2.根據權利要求1所述的鑒定方法，其特征在于，所述步驟（3）中，若在辣椒雄性不育三系雜交種中僅出現父本的擴增條帶，則判斷其為親本的假雜交種且含雄性不育恢復基因；若在辣椒雄性不育三系雜交種中僅出現母本的擴增條帶，則判斷其為親本的假雜交種且不含雄性不育恢復基因。
3.根據權利要求1所述的鑒定方法，其特征在于，所述基因組DNA提取自辣椒雄性不育三系雜交種及其父本、母本的種子或者植株葉片。
4.根據權利要求1所述的鑒定方法，其特征在于，所述步驟（2）中PCR擴增條件為：95℃預變性?5min；95℃變性?30s，58℃退火15s，72℃延伸1min，重復35?個循環；72℃總延伸5min，4℃保存。
5.根據權利要求1所述的鑒定方法，其特征在于，所述辣椒雄性不育三系雜交種為色素加工型辣椒雄性不育三系雜交種。
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