[發(fā)明專利]一種制備生物活性肽的方法

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• 申請日: 2021-08-25
• 公開（公告）號: CN113699201A
• 公開（公告）日: 2021-11-26
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 邵洪澤;肖丹;王思月;曲磊;任銳
• 申請（專利權(quán)）人: 吉林省畜牧獸醫(yī)科學(xué)研究院;吉林省農(nóng)業(yè)科學(xué)院
• 主分類號: C12P21/00
• 分類號: C12P21/00;A23K20/147;A23K10/37;A23K10/12;C12R1/125;C12R1/865
• 代理公司: 深圳市韋恩肯知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 44375
• 代理人: 李華雙

本發(fā)明提供了一種制備生物活性肽的方法，所述方法包括以下步驟：(1)將中藥藥渣加入到液體發(fā)酵培養(yǎng)基中，然后接種樺褐孔菌進(jìn)行發(fā)酵預(yù)處理；(2)發(fā)酵預(yù)處理結(jié)束后，在液體發(fā)酵培養(yǎng)基中補(bǔ)加(NH₄)₂SO₄，將液體發(fā)酵培養(yǎng)基的pH調(diào)節(jié)至7.0，然后接種枯草芽孢桿菌和釀酒酵母菌繼續(xù)發(fā)酵培養(yǎng)，得到所述生物活性肽。該方法極大地提高發(fā)酵產(chǎn)品的飼用品質(zhì)和效率，具有顯著的經(jīng)濟(jì)性、環(huán)保性和高效性的特點(diǎn)。采用該方法制得的發(fā)酵產(chǎn)品適口感較好，小分子肽含量較高，將其加入到飼料中能有效降低仔豬的腹瀉發(fā)病率，提高采食量和料肉比，還能有效改善飼料適口性，提高飼料轉(zhuǎn)化率，提高育肥豬出欄重。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種制備生物活性肽的方法。

背景技術(shù)

近年來，代抗生素的制劑有很多，其中生物活性肽在生物體內(nèi)無抗原性，食用安全性高，其抑菌特性可減少抗菌藥的使用，已成為“無抗”養(yǎng)殖飼料的研究熱點(diǎn)。生物活性肽由2-20個(gè)氨基酸組成，分子質(zhì)量6KD以下，氨基酸組成和序列決定其活性功能。在動(dòng)物生產(chǎn)中能夠改善飼料適口性、優(yōu)化動(dòng)物生產(chǎn)性能。在農(nóng)村農(nóng)業(yè)部開展獸用抗菌藥減量化使用工作的背景下，為提高畜禽生產(chǎn)性能和效益，開發(fā)利用活性肽作為飼料添加劑或藥物將給養(yǎng)殖行業(yè)創(chuàng)造出巨大的價(jià)值，是推動(dòng)“無抗”養(yǎng)殖的重要途徑。

目前，生產(chǎn)獲取食源性生物活性肽的工藝方法主要分為3種：酶水解法、微生物發(fā)酵法和人工合成法。

①酶法制備生物活性肽。酶法合成生物活性肽，其產(chǎn)品安全性極高，生產(chǎn)條件溫和，水解易控制，可定位生產(chǎn)特定的肽，成本低，已成為最主要的生產(chǎn)方法之一。利用蛋白酶制備生物活性肽可以使多肽產(chǎn)品具有良好的溶解性、耐酸和耐熱及較高的速溶性等優(yōu)點(diǎn)。然而，在酶解過程中某種蛋白質(zhì)會(huì)產(chǎn)生苦味肽，影響了生物活性肽的實(shí)際應(yīng)用。

②人工合成法制備生物活性肽。經(jīng)典固相多肽合成法主要是將帶有氨基保護(hù)基團(tuán)的氨基酸的羧基端固定到不溶性樹脂上，脫去該氨基酸上的氨基保護(hù)基，同下一個(gè)氨基酸的活化羧基形成酯鍵，從而將肽鏈延伸形成多肽。多肽固相合成法經(jīng)過不斷改進(jìn)和完善，已經(jīng)廣泛用于多肽和蛋白質(zhì)的研究領(lǐng)域，尤其是短肽的合成。而其主要的缺點(diǎn)表現(xiàn)為直接合成的序列短、耗時(shí)、合成效率和純度低、成本高及合成試劑的毒性大等。

③微生物發(fā)酵法制備生物活性肽。微生物發(fā)酵法是利用微生物自身分泌的胞外酶將發(fā)酵底物蛋白質(zhì)分解的過程。其較酶法相比減少了蛋白酶的純化和制備過程。微生物法作為一種新的制備生物活性肽的方法，具有微生物蛋白酶來源廣、酶產(chǎn)量高、生長周期短及生產(chǎn)成本低等優(yōu)越性。與此同時(shí)，利用微生物法可以直接生產(chǎn)脫苦的活性肽，這樣可以使蛋白質(zhì)的水解以及多肽的脫苦同步進(jìn)行，實(shí)現(xiàn)一步法制備多肽，大大降低了成本。微生物不僅可以直接發(fā)酵制備生物活性肽，而且可以提供廉價(jià)的商品酶，為生物活性肽的制備創(chuàng)造了良好的條件。但該方法也存在一定的缺點(diǎn)：很多優(yōu)良的產(chǎn)酶菌株被證明是有毒或是有害，因此存在一定的安全問題。如何將新技術(shù)交叉應(yīng)用到微生物發(fā)酵法制備生物活性肽的研究，開發(fā)出新的產(chǎn)品，利用肽類藥物和功能性飼料具有天然、無副作用等特點(diǎn)，進(jìn)行家畜的無抗養(yǎng)殖，以提高人們的生活質(zhì)量。不但符合健康中國發(fā)展理念，而且給企業(yè)帶來的經(jīng)濟(jì)效益也是不可估量。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明基于對多菌分步發(fā)酵預(yù)中藥藥渣產(chǎn)生物多肽的方法探索研究結(jié)果，提供了一種制備生物活性肽的方法。

為實(shí)現(xiàn)上述目的，所采取的技術(shù)方案：一種制備生物活性肽的方法，所述方法包括以下步驟：

(1)將中藥藥渣加入到液體發(fā)酵培養(yǎng)基中，然后接種樺褐孔菌進(jìn)行發(fā)酵預(yù)處理；

(2)發(fā)酵預(yù)處理結(jié)束后，在液體發(fā)酵培養(yǎng)基中補(bǔ)加(NH₄)₂SO₄，將液體發(fā)酵培養(yǎng)基的pH調(diào)節(jié)至7.0，然后接種枯草芽孢桿菌和釀酒酵母菌繼續(xù)發(fā)酵培養(yǎng)，得到所述生物活性肽。

優(yōu)選地，所述步驟(1)中中藥藥渣包括補(bǔ)氣益氣類中藥藥渣。