[發明專利]雞蛋凍干粉恩諾沙星和環丙沙星參考物質侯選物及其制備方法

在審

• 申請號: 202110980072.7
• 申請日: 2021-08-25
• 公開（公告）號: CN115728397A
• 公開（公告）日: 2023-03-03
• 發明（設計）人: 夏曦;李曉薇;杜靜靜;王成飛
• 申請（專利權）人: 中國農業大學
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06;G01N30/08;G01N30/14;G01N30/34;G01N30/36;G01N30/72;G01N1/28;G01N1/38;G01N1/42
• 代理公司: 北京紀凱知識產權代理有限公司 11245
• 代理人: 劉鑫鑫

本發明公開了雞蛋凍干粉恩諾沙星和環丙沙星參考物質侯選物及其制備方法。本發明方法，包括如下步驟：S1、對第一組蛋雞給藥恩諾沙星，收集含有恩諾沙星雞蛋；對第二組蛋雞給藥環丙沙星，收集含有環丙沙星雞蛋；S2、將空白雞蛋、含有恩諾沙星雞蛋和含有環丙沙星雞蛋分別凍干，得到空白雞蛋凍干粉、含有恩諾沙星雞蛋凍干粉和含有環丙環丙沙星雞蛋凍干粉；S3、將空白雞蛋凍干粉、含有恩諾沙星雞蛋凍干粉和含有環丙沙星雞蛋凍干粉粉碎后混勻，即得。本發明由雞的喂養開始，制備參考物質侯選物及基體標準物質，還原了恩諾沙星和環丙沙星在雞體內完整的代謝過程；本發明基體標準物質滿足了恩諾沙星和環丙沙星殘留檢測中質量控制和方法學驗證的需求。

技術領域

本發明屬于基體標準物質技術領域，尤其涉及雞蛋凍干粉恩諾沙星和環丙沙星參考物質侯選物及其制備方法。

背景技術

恩諾沙星和環丙沙星屬于第三代氟喹諾酮類藥物，對革蘭氏陰性菌和革蘭氏陽性菌均有較高的抗菌活性，同時對治療支原體、衣原體感染也有較好的抗菌作用，具有毒副作用小，與其他抗菌治療藥物無交叉耐藥性等特點，故能夠與β-內酰胺類、氨基糖苷類、大環內酯類藥物進行聯合治療，以增強其抗菌活性。上述藥物具有抗菌譜廣、殺菌力強、可與多種藥物聯合應用等特點，但是由于養殖戶缺乏藥物的相關知識，使得藥物濫用以及不遵循休藥期的情況常有發生，導致了動物組織中藥物含量不斷的富集。藥物通過食物鏈蓄積在體內，人體若長期攝入含有喹諾酮類藥物殘留的食品，對人體的中樞神經系統、消化系統、泌尿系統以及幼兒軟骨均有嚴重影響，目前實驗表明恩諾沙星在實驗動物中顯示一定的致突變和胚胎毒作用，高劑量的環丙沙星易導致肝細胞變性或壞死。環丙沙星是恩諾沙星在動物體內的代謝物，GB-31650-2019中規定恩諾沙星在家禽產蛋期禁用，故對于檢測動物源性食品中的恩諾沙星和環丙沙星方法的需求十分迫切。

在獸藥殘留檢測中，樣品的基質成分十分復雜。單純采用純標準品制備的添加樣品進行方法評價存在諸多弊端，例如在檢測過程中存在明顯的基質效應的干擾，運用基體標準物質對檢測過程和結果進行質控和校準是最為有效的手段。因此基體標準物質的研制在獸藥殘留檢測過程中具有十分重要的作用。標準物質是一種或多種足夠均勻、穩定并有特性量值用于評價方法，校準儀器設備，給材料賦值的物質?！盎w標準物質”是具有最高計量學特征、用基準方法確定特性量值的標準物質。

缺乏基體標準物質是制約動物源性食品-雞蛋中恩諾沙星和環丙沙星獸藥殘留檢測技術取得突破的最大障礙。然而制備基體標準物質的首要步驟是參考物質候選物的制備。候選物應盡可能與實際樣品一致，這樣才最大限度克服由于基體效應所引起的誤差，從而保證量值傳遞的準確。

目前于國家標準物質資源共享平臺上可以查詢到如下涉及到恩諾沙星和環丙沙星的標準物質。包括魚肉粉中、蜂蜜中、雞肉粉中、雞蛋液中、甲醇中的恩諾沙星或者環丙沙星殘留分析標準物質以及恩諾沙星或者環丙沙星純度標準物質，同時包含恩諾沙星和環丙沙星的標準物質只有甲醇溶液中。雞蛋作為我國最常食用的食物之一，且GB-31650-2019中規定恩諾沙星和環丙沙星在產蛋期是禁用的，故而雞蛋中的恩諾沙星和環丙沙星的獸藥殘留監測是十分重要的。國外從20世紀80年代起即有文獻報道研制動物組織中的關鍵技術，就動物組織如肌肉、內臟、血液來說，新鮮或需冷凍保存的樣品由于運輸、保存及均勻過程較困難，所以將這些基質真空干燥制成凍干粉是一個較好的選擇。因此，提供雞蛋凍干粉恩諾沙星和環丙沙星參考物質候選物及基體標準物質是當前需要解決的技術問題。

恩諾沙星和環丙沙星現有多種殘留檢測方法，但由于參考物質候選物的后續測定要求量值準確、靈敏度高。因此，需要開發出一種雞蛋凍干粉中恩諾沙星和環丙沙星的檢測方法。

發明內容

本發明的目的是提供雞蛋凍干粉恩諾沙星和環丙沙星參考物質侯選物及其制備方法，該參考物質后續物可以最大限度克服由于雞蛋基質效應所引起的誤差，且滿足國內外對雞蛋中恩諾沙星和環丙沙星殘留實驗室的質量控制及方法驗證的需求，填補了喹諾酮類藥物基體標準物質的空白，為雞蛋中恩諾沙星和環丙沙星殘留分析提供了量值溯源的依據。