[發明專利]一種用于微生物孢子的快速檢測方法

在審

• 申請號: 202110973148.3
• 申請日: 2021-08-24
• 公開（公告）號: CN114235760A
• 公開（公告）日: 2022-03-25
• 發明（設計）人: 付玉明;孫儒馨;劉紅
• 申請（專利權）人: 北京航空航天大學
• 主分類號: G01N21/64
• 分類號: G01N21/64;G01N21/01
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種微生物孢子快速檢測方法，該微生物孢子快速檢測方法使用AMP、UTP和熒光素/熒光素酶溶液進行熒光反應，其特征為，所述的微生物孢子存在于經過消殺的潔凈間環境中，取樣步驟如下：

1)微生物孢子收集，空氣中的微生物孢子收集自空氣采樣器濾網，表面微生物孢子收集自采樣拭子；

2)非孢子微生物去除；

3)微生物孢子離心、濃縮、熱裂解。

檢測步驟如下：

1)使用移液器吸取50μL待測樣本至特定反應容器；

2)使用移液器吸取50μLUTP溶液至特定反應容器中，與樣品混合靜置5min；

3)將特定反應容器放置于單光子計數器感光區，加入熒光素/熒光素酶溶液獲得熒光強度；

4)根據標準曲線，計算微生物孢子數量。

微生物孢子快速檢測方法，試劑配制步驟如下：

1)熒光素/熒光素酶溶液，熒光素濃度為0.1mmol/mL，熒光素酶濃度為0.1mg/mL，-18℃保存。

2)AMP標準溶液，AMP標準溶液母液濃度為5mg/mL，共稀釋6個梯度，0.5mL/管分裝，-18℃保存。

2.根據權利要求1所述的微生物孢子檢測方法，按權利要求1取樣步驟所述，其特征在于，1)微生物孢子收集：空氣中的微生物孢子收集自空氣采樣器濾網，表面微生物孢子收集自采樣拭子；2)對濾網/拭子上的微生物孢子進行洗脫，對洗脫液進行80℃熱激去除非孢子微生物；3)12000rpm離心取沉淀，將熱裂解后的樣品作為待檢測的微生物孢子樣本。

3.根據權利要求1所述的微生物孢子檢測方法，按權利要求1檢測步驟所述，其特征在于熱裂解溫度為195℃。

4.根據權利要求1所述的微生物孢子檢測方法，按權利要求1檢測步驟所述，其特征在于，1)使用移液器吸取50μL待測樣本至特定反應容器；2)使用移液器吸取50μLUTP溶液至特定反應容器中，與樣品混合靜置5min，使待測樣品中的AMP與UTP充分反應；3)將特定反應容器放置于單光子計數器感光區，加入50μL熒光素/熒光素酶溶液獲得熒光強度；4)根據標準曲線，計算微生物孢子數量，以50μL二次水為空白對照，以50μL梯度AMP溶液為標準液繪制標準曲線。

5.按照權利要求4所述步驟，AMP標準溶液母液濃度為5mg/mL，共稀釋6個梯度。

6.按照權利要求4所述步驟，供能物質為UTP標準液，UTP標準液濃度為0.01mmol/mL。

7.權利要求1-6中任一所述的微生物孢子快速檢測方法在微生物孢子檢測中的應用。