[發(fā)明專利]蓮葉桐核酸提取改良版CTAB法在審
| 申請?zhí)枺?/td> | 202110973065.4 | 申請日： | 2021-08-24 |
| 公開（公告）號： | CN113584018A | 公開（公告）日： | 2021-11-02 |
| 發(fā)明（設(shè)計）人： | 王勇;于靖;倪靚;譚佐莉;張修含;張世杰 | 申請（專利權(quán)）人： | 海南師范大學 |
| 主分類號： | C12N15/10 | 分類號： | C12N15/10 |
| 代理公司： | 成都方圓聿聯(lián)專利代理事務(wù)所(普通合伙) 51241 | 代理人： | 茍銘 |
| 地址： | 571158*** | 國省代碼： | 海南;46 |
| 權(quán)利要求書： | 查看更多 | 說明書： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 蓮葉 核酸 提取 改良 ctab | ||
1.蓮葉桐核酸提取的方法，其特征在于，包括如下步驟：
(1)取適量新鮮蓮葉桐葉片，置于預冷的研缽中，加入液氮充分研磨，將粉末轉(zhuǎn)至離心管中，加入預熱溫度為65℃的裂解液，混勻，加入RNA酶，渦旋震蕩1min，混勻后65℃水浴鍋中水浴加熱40min，每隔10min顛倒搖勻一次，所述裂解液組成為：2％(m/v)CTAB,0.1mol/LTris-HCl pH8.0,20mmol/L EDTA,1.4mol/L NaCl,2％(m/v)β疏基乙醇，2％(m/v)PVP；
(2)放置冷卻至室溫，加入等體積的Tris平衡酚︰氯仿︰異戊醇＝25︰24︰1,在轉(zhuǎn)速為11000～13500rpm室溫下離心10～15min；
(3)取上清液轉(zhuǎn)入一新離心管，加入1/10倍體積的3mol/LNaAc和等體積的異丙醇，混勻于-20℃放置40～60min，在轉(zhuǎn)速為11000～13500rpm 4℃離心10～15min；
(4)棄上清，沉淀用體積濃度70％乙醇洗滌2～4次，加入50～250μL TE，充分混勻后，加入1/10倍體積的3mol/LNaAc和等體積的異丙醇，混勻于-20℃放置40～60min，在轉(zhuǎn)速為11000～13500rpm 4℃離心10～15min；
(5)棄上清，沉淀用體積濃度70％乙醇洗滌2～4次，室溫靜置20～30min晾干，加入50～250μL TE緩沖液溶解，充分混勻后，置于－20℃冰箱中保存。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的蓮葉桐核酸提取的方法，其特征在于，所述步驟(1)中的RNA酶濃度為20mg/ml。
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