[發明專利]豬易感相關致病菌檢測的LAMP引物組及基于此的試劑盒和LAMP芯片和應用

有效

• 申請號: 202110965791.1
• 申請日: 2021-08-23
• 公開（公告）號: CN113637781B
• 公開（公告）日: 2022-07-19
• 發明（設計）人: 劉雪蘭;李郁;湯杰;李槿年;許發芝;陳芳芳
• 申請（專利權）人: 安徽農業大學
• 主分類號: C12Q1/689
• 分類號: C12Q1/689;C12Q1/6844;C12Q1/6837;C12Q1/04;C12Q1/10;C12N15/11;C12R1/21;C12R1/42;C12R1/46;C12R1/01
• 代理公司: 北京高沃律師事務所 11569
• 代理人: 劉奇

本發明屬于病菌檢測技術領域，特別是涉及豬易感相關致病菌檢測的LAMP引物組及基于此的試劑盒和LAMP芯片和應用。本發明提供了豬易感相關致病菌檢測的LAMP引物組，所述LAMP引物組包括豬胸膜肺炎放線桿菌引物組、副豬嗜血桿菌引物組、豬霍亂沙門氏菌引物組、豬支氣管敗血波氏桿菌引物組、多殺性巴氏桿菌引物組等。本發明提供的LAMP引物組特異性高，同時進行檢測豬易感病菌時不會出現交叉反應，能夠精準的判斷患病種類，并且具有良好的靈敏性。將上述LAMP引物組利用微流控芯片技術應用于檢測中，可在等溫條件下快速、高效、高特異性地擴增目的基因序列，并且在1h內完成擴增；具備的簡便快捷的有點更適合基層適用性。

技術領域

本發明屬于LAMP檢測試劑制備技術領域，特別是涉及豬易感相關致病菌檢測的LAMP引物組及基于此的試劑盒和LAMP芯片和應用。

背景技術

規模化養殖的程度不斷提高能夠有效提高養殖業的效益，但是這種養殖模式會提高豬群疾病發生的概率，還會對傳染類疾病的防控帶來新的挑戰。現階段制約養豬業發展的第一大因素就是疾病，就現階段豬病流行的狀況而言，多種病原菌的混合感染是目前豬場疾病發展的一個趨勢。其中豬支氣管敗血波氏桿菌、豬沙門氏菌、豬多殺性巴氏桿菌等豬呼吸及豬繁殖疾病的發病率在逐漸增加。

豬源疾病呈現多元化的發展趨勢，也增加了疾病的防控難度。為了防控豬源疾病，建立對豬場發病豬的混合病原菌的快速檢測機制，是對豬疾病控制的關鍵所在。

針對于豬易感病原菌的檢測技術主要包括傳統的微生物學診斷技術、血清學診斷技術和分子生物學診斷技術。目前以PCR為代表的分子生物學診斷技術及其衍生檢測技術占據主體，但是上述技術都存在一定的局限性，如檢測流程繁瑣、工作量大、檢測儀器要求高等缺陷。因此，在科學研究及生產實踐中開發出一種能夠同時檢測多種病原菌的快速簡便檢測方法較為迫切。

發明內容

為了解決上述問題，本發明提供了涉及豬易感相關致病菌檢測的LAMP引物組及基于此的試劑盒和LAMP芯片。本發明提供的多組LAMP引物組具有靈敏度高、特異性強的優勢，能夠同時檢測多種病原菌。

為了實現上述目的，本發明提供了如下技術方案：

本發明提供了豬易感相關致病菌檢測的LAMP引物組，所述豬易感相關致病菌包括：豬胸膜肺炎放線桿菌、副豬嗜血桿菌、豬霍亂沙門氏菌、豬支氣管敗血波氏桿菌、多殺性巴氏桿菌、豬鏈球菌和豬丹毒；所述LAMP引物組包括豬胸膜肺炎放線桿菌引物組、副豬嗜血桿菌引物組、豬霍亂沙門氏菌引物組、豬支氣管敗血波氏桿菌引物組、多殺性巴氏桿菌引物組、豬鏈球菌引物組和豬丹毒引物組；

所述豬胸膜肺炎放線桿菌引物組包括核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示的正向外引物F3，核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示的反向外引物B3，核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示的正向內引物FIP和核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示的反向內引物BIP；

所述副豬嗜血桿菌引物組包括核苷酸序列如SEQ ID NO.5所示的正向外引物F3，核苷酸序列如SEQ ID NO.6所示的反向外引物B3，核苷酸序列如SEQ ID NO.7所示的正向內引物FIP和核苷酸序列如SEQ ID NO.8所示的反向內引物BIP；

所述豬霍亂沙門氏菌引物組包括核苷酸序列如SEQ ID NO.9所示的正向外引物F3，核苷酸序列如SEQ ID NO.10所示的反向外引物B3，核苷酸序列如SEQ ID NO.11所示的正向內引物FIP和核苷酸序列如SEQ ID NO.12所示的反向內引物BIP；

所述豬支氣管敗血波氏桿菌引物組包括核苷酸序列如SEQ ID NO.13所示的正向外引物F3，核苷酸序列如SEQ ID NO.14所示的反向外引物B3，核苷酸序列如SEQ ID NO.15所示的正向內引物FIP和核苷酸序列如SEQ ID NO.16所示的反向內引物BIP；